使用动态光散射和Coulter原理的粒子表征

脂质体是直径50nm至5μm的特殊脂质囊泡。脂质体在许多行业中具有广泛的应用范围,包括化妆品,纺织品,医学行业和生物学研究。

从质量透视(克/升)和计数透视(颗粒/升)中测定精确的脂质体浓度,可以帮助医疗行业中的治疗化合物的精确剂量。欧洲杯猜球平台对于仿生体系,确定脂质体的总数对于膜蛋白的有效和功能性重建至脂质体是至关重要的。合奏技术包括沉降,筛分和光散射(动态和静态)。

离散的特征技术包括电子显微镜,光学显微镜和Coulter原理。沉降和筛分技术具有非常有限的准确性,并且需要每次测量时长时间。

DLS有助于测量样品的平均直径和多分散性,然而作为集合技术,集中信息从根本上无法使用。离散技术,例如电子和光学显微镜,可提供精确的尺寸和颗粒形状。欧洲杯猜球平台使用DLS的Coulter原理提供额外的细节以及浓度,同时验证从DLS衍生的严格,逐个粒子的尺寸信息。

方法

Delsamax核心分析

Librede是脂质发展的领先公司购买了脂质体。在生产的三周内,分析了脂质体。脂质体由脂质型DphPC制成(1,2-二氰酰-N-甘油-3-磷光啉);悬浮缓冲液包含150mM NaCl,5mm CaCl2,10mm hepes和ph8.0。初始浓度为0.8mg / ml。

关于DLS分析Delsamax核心,将脂质体稀释1:100在去离子,亚微米过滤水中,导致终浓度为0.008mg / mL,并使用20μl样品在一次性环状聚烯烃比色皿中分析。脂质体样品效活五次;每次运行都包括三次收购,持续五秒钟/收购。设定的细胞温度为25℃。

适用于所有样品的平方和平方(SOS)小于10,表示清洁样品,没有灰尘或气泡的任何污染。报告的直径和多分散性来自累积分析,它假定单态曲面样本,正则化分析(图2中所示的代表数据)表明样品是单峰的。

Delsamax核心的分析只需一秒钟,并且可以容易地从MS4E验证尺寸数据,如图2所示。在320.2±19.8nm,非常接近地报告Delsamax核心中的脂质体的平均直径。从MS4E(343nm)的脂质体的平均直径和大于MS4e的中值尺寸(292nm)的平均直径示于表1中。

在图1中,粒度在距宽度小于10nm的箱中绘制。直径范围(X轴)横跨400个总箱。表1.两个报告的平均直径在10%以内,支持每个粒子表征方法的真实性

脂质体的差异数量。

图1。脂质体的差异数量。图片信用:Beckman Coulter

动态光散射测量DphPC脂质体的平均直径。

图2。动态光散射测量DphPC脂质体的平均直径。图片信用:Beckman Coulter

Delsamax Pro分析

来自Librede的DphPC脂质体也分析了Delsamax Pro,提供同时尺寸和Zeta潜力。为了比较,来自Lypo-SpheriC TM的通用脂质体也在水中稀释并运行。

在与上述(0.008mg / ml)的相同条件下,晶沸性脂质体在与水中的〜0.05mg / ml的水中进行。将样品注入流动细胞(〜200pl /样品),并分析每种样品共五次。Zeta电位收集期为20秒,在此期间收集DLS数据(10次运行,2 s /运行)。所有样品在25℃下运行。图3示出了代表尺寸和Zeta电位,而定量数据如表2所示。

表格1。两个报告的平均直径在10%以内,支持每种颗粒表征方法的真实性。

来自Coulter原理(MS4E)和动态光散射的数据的比较(Delsamax核心)
仪器 技术 平均直径 中位数直径 多分散性
Delsamax核心 动态光散射 320.2 + 19.8nm N / A. 42.0 + 8.2nm
MS4E. Coulter原则 343 + 174nm 292nm. N / A.

表2。注意,来自Librede的挤出脂质体具有更小的多分散性,表明样品的尺寸更均匀。

来自Libo-Spheric TM和Librede提供的含有Libo-Spheric TM和挤出脂质体的数据的比较
类型 平均直径 多劣化 Zeta潜力
DphPC脂质体 307.4 + 2.6nm 47.8 + 16.2nm -68.01 + 3.1mv.
仿制性脂质体 494.8 + 60.4nm 141.2 + 17.2nm -99.94 + 3.03mv

普通脂质体与Dphpc挤出脂质体对Delsamax Pro的比较。(a)来自所有31个Zeta潜在探测器的原始迁移率数据用于DphPC脂质体的潜在探测器;(b)来自所有31个Zeta电位检测器的原始迁移率数据用于通用脂质体(c)两种脂质体的直径比较。注意,在通用脂质体中清楚地存在较大的欧洲杯猜球平台颗粒。

普通脂质体与Dphpc挤出脂质体对Delsamax Pro的比较。(a)来自所有31个Zeta潜在探测器的原始迁移率数据用于DphPC脂质体的潜在探测器;(b)来自所有31个Zeta电位检测器的原始迁移率数据用于通用脂质体(c)两种脂质体的直径比较。注意,在通用脂质体中清楚地存在较大的欧洲杯猜球平台颗粒。

图3。普通脂质体与Dphpc挤出脂质体对Delsamax Pro的比较。(a)来自所有31个Zeta潜在探测器的原始迁移率数据用于DphPC脂质体的潜在探测器;(b)来自所有31个Zeta电位检测器的原始迁移率数据用于通用脂质体(c)两种脂质体的直径比较。注意,在通用脂质体中清楚地存在较大的欧洲杯猜球平台颗粒。图片信用:Beckman Coulter

多学器4E Coulter计数器分析

相同的库存脂质体溶液中使用Delsamax核心分析用于多学器4e分析。ISOTON II稀释剂(Beckman Coulter,Inc。)用于稀释脂质体,并且在配备10μm孔的多学器4e仪器上运行相同。

用19.995ml等室II(1:4,000稀释)稀释5μl库存脂质体溶液(0.8mg / ml)。安装了10μm孔,分析,分析范围为0.2-6μm,具有400尺寸的箱子对数间隔开。为了确定脂质体摩尔性,分析以体积模式运行,共分析10μL样品。进行了十个独立的运行。

讨论

多学器4e Coulter计数器(MS4E)基于Coulter原理的任何仪器的最大动态范围,跨越200nm,高达1,600μm。通过分析整个样品逐粒子,可以容易地检测和量化任何异常值。

由于MS4E数字地获取并节省脉冲高度和宽度数据,因此可以使用任何分析宽度进行重新分析。因此,用户可以放大感兴趣的区域,并且直径小于0.1nm的粒子箱尺寸,如图4所示。

鉴于MS4E数据的缩小视图。因为脉冲数据被数字上保存,所以可以重新计算粒度箱宽度以具有所需的任何宽度,最小宽度小于0.1nm / bin。在该图中,显示来自235nm至240nm的脂质体颗粒的百分比。欧洲杯猜球平台

图4。鉴于MS4E数据的缩小视图。因为脉冲数据被数字上保存,所以可以重新计算粒度箱宽度以具有所需的任何宽度,最小宽度小于0.1nm / bin。在该图中,显示来自235nm至240nm的脂质体颗粒的百分比。欧洲杯猜球平台图片信用:Beckman Coulter

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