EVOQ ELITE LC-MS / MS仪器在人血浆中免疫抑制药物分析中的应用

免疫抑制药物可抑制免疫系统对外来组织的排斥，应用于器官移植患者。这些药物的药代动力学变化大，治疗指标狭窄，需要对其进行监测，以提高对器官移植患者剂量要求的科学认识。直到最近，免疫测定一直是这些药物治疗监测的主要方法。

液相色谱 - 质谱（LC-MS / MS）现在越来越多地用于鉴定免疫抑制药物。通过消除免疫测定中的代谢物的交叉反应，LC-MS / MS技术提供了选择性，灵敏度和准确性的独特益处。如果在高通量过程中使用，它可以弥补LC-MS / MS仪器的初始成本和经验丰富的分析化学家。

本文讨论了该方法的应用EVOQ ELITE LC-MS / MS系统同时分析人血浆中的依维莫司、西罗莫司、他克莫司和环孢素A。

EVOQ ELITE LC-MS / MS系统

EVOQ三相四极杆用于液相色谱(LC-TQ)(图1)，其目的只有一个:在尽可能快的样品报告时间内对许多真实样品进行可靠的定量。

它提供了前所未有的灵敏度，线性，准确度，精密度和广泛的动态范围的多反应监测(MRM)分析。大气压电离技术和软件的发展使其成为常规高灵敏度定量分析的革命性技术。

图1所示。EVOQ ELITE LC-MS / MS系统。

通过最低系统延迟容积，预先LC泵技术在分析流速下提供了前所未有的弹道梯度再现性。这种设计设计功能可降低梯度延迟并确定高度精确的保留时间，从而较短的运行到循环时间，具有对定量LC-MS / MS分析的重现性的重现性。

通过促进方法驱动的，在线清理或样品预浓度，通过OLE模块延伸LC-TQ性能。在同一模块中包含第三泵可节省台式空间并在完全软件控制下简化配置，同时提供快速方法开发的灵活性。以下是EVOQ ELITE LC-MS / MS系统的关键优势：

• 由于新型交错的四极（IQ）双离子漏斗，可以容易地获得对生物分子和微小分子的超高敏感性。
• 可靠地运行基质丰富的样品在强大的孔板基于API接口。
• 利用新型真空绝缘探针(VIP)加热电喷雾探针，可以在高流速下有效地分析热不稳定分子。
• 基于异常的数据审查软件通过方便地突出显示不满足预设方法标准的色谱图来节省时间。

实验程序

样品制备涉及MeOH中稀释血管莫血清，西罗莫司，巨杆菌和环孢菌素A和环孢菌素A的标准溶液，以制备主要储备溶液，然后将它们钉在矩阵坯料中以进行校准溶液。将血浆基质坯料的制备涉及将9ml冷乙腈混合到3ml等离子体中（3：1V / v）。

然后将得到的溶液旋转30秒，在温度下静置15分钟，然后在15000rpm离心15分钟。将上清液分离为基质空白，使基质加入标定溶液。

色谱法(推进UHPLC)

• 柱：YMC Triart C18（50mm x 2.1mm x1.9μm）
• 柱温:80°C
• 流量:0.5毫升/分钟
• 流动阶段A：水与0.1％甲酸+ 10mm铵形式
• 流动相B:乙腈+ 0.1%甲酸
• 梯度条件：

  0.00分钟	60%乙
  1.25分钟	60%乙
  1.40分钟	98%乙
  3.00分钟	98%乙
  3.01分钟	60%乙
  4.00分钟	60%乙

• 注入量:5µL

质谱仪（EVOQ ELITE）

• Hesi：+ 4500V
• 探头温度：450°C
• 探针气：45个单位
• 喷雾器气体:40个单位
• 锥气体温度：350°C
• 锥气:20单位
• 主动排气：上
• 碰撞气体：氩arg 1.25mtorr

结果

每种化合物的优化MRM转变都列于表1中。选择性和灵敏度EVOQ ELITE LC-MS / MS系统仅用蛋白质沉淀简化样品制剂，从而能够直接进给上清液进行随后的分析。LC-MS / MS系统测定对血管血管，西罗莫司，甲状腺素，西罗莫司和Tacrolimus的浓度水平为0.5ng / ml，对人血浆中环孢菌素A的10ng / ml。

表1．优化的MRM转换。

化合物	父子离子	生产	碰撞能量(V)
他克莫司	821.5.	768.3.	16
西罗莫司	931.5.	864.5	16
埃弗洛米斯	975.7	908.4	16
Ascomcin（是）	809.5	756.5.	16
环孢霉素	1220.1	1203.2	22
环孢霉素D(是)	1234.2.	1217.3	21

The representative chromatograms at these levels in plasma are delineated in Figure 2. The Bruker MSWS software that controls the EVOQ LC-MS/MS system was equipped with the optional PACER™ software, which allows for ‘exception based data-review’ to drastically minimize the error rate of peak integration for quantitative analysis.

图2。四种免疫抑制剂在血浆基质中的MRM色谱图。

PACER™处理的四种免疫抑制剂在血浆基质中的校准曲线如图3所示。依维莫司、西罗莫司、他克莫司在0.5 ~ 50ng/mL范围内呈线性关系²>0.997，环孢素A在10ng/mL ~ 1000ng/ mL范围内与R²> 0.995。

一系列七级校准（每次三次重复）和三级QC标准（每六次重复）都被重复执行五次以证实鲁棒性EVOQ LC-MS / MS系统．r.²校准曲线被观察到> 0.994，每个QC水平的RSD通常在200多个基质样品中横跨200分变量为3-8％。

结论

在本分析中，使用EVOQ Elite LC-MS/MS系统分析了四份受免疫抑制药物影响的人血浆样品，并对血浆样品进行了简单的蛋白沉淀。结果表明，该方法快速、灵敏、高效，定量限提高，易于满足人体血浆中此类药物的定量要求。

这些信息已采购，审查和调整Bruker - Chemical and Applied Markets提供的材料。欧洲杯足球竞彩

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