新的简单,便携和强大的荧光寿命系统和专用的FRET计算器,标配新版本Easylife V软件是确定多相体系中两个荧光团之间的距离的理想方法,如胶束、囊泡、脂质体或膜。
实验
举个例子,考虑一下Tritonx胶束以苝为供体,罗丹明B为受体的水溶液。苝是一种芳香烃,几乎不溶于水,将寻求一个高度疏水的环境,并将只局限于TritonX胶束内。
图在图1中示出。
图1
它的荧光衰减(图中示踪D)为单指数型,寿命为5.7ns。罗丹明B是一个亲水分子,将主要在水相,但一些部分也会在胶束中扩散。当D和A都局限于同一胶束时,就会发生能量转移。的Perylene腐烂在添加罗丹明B之后,在图中显示为迹线D + A。
现在随着受体分子的添加,衰减是双指数,短寿命为1.69ns(27%),长寿的5.74ns(73%),后者与供体单独相同(痕量D.)。
结果与结论
现在可以得出以下结论
- 27%的含苝的胶束也含有罗丹明B受体,胶束内的FRET非常有效,因为供体寿命被猝灭至1.69 ns。
- 对于在水相中的罗丹明B分子,平均距离太大而不能引起胶束嵌入的腓尼。
- 为了求得胶束中D和A之间的平均距离,打开烦恼的计算器,输入D单独存在时的寿命(5.7ns), D在A存在时的寿命(1.69 ns)和Ro = 47.5 Å(由另一项实验确定,参见烦恼的计算器),点击计算,距离为41.1 Å。
- 另外,一个效率(70%)和速率常数(4.2x108 s-1)。这很简单!
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