肽的合成是一个复杂的过程,涉及几个合成步骤。固相肽合成(SPPS)是改变合成过程的初始步骤。通过缩短使用微波辐射进行肽合成所需的时间,该过程通过微波合成进一步加速,从而减少耦合和脱保护步骤所需的时间。下一步是减少肽合成所需的时间和合成过程中产生的废物量。使用Liberty Blue可以方便地完成这些步骤,而不会影响微波肽合成的高纯度。
图1。自由的蓝色
自由的蓝色
这个自由蓝(图1)在肽化学转化过程中,使用了前所未有的硬件和化学进展的结合。没有限制点导致快速添加试剂。Liberty Blue进一步优化了微波步骤,以便在不导致肽过热的情况下,将最大可能的微波能量应用于肽大量或不需要的副反应。这导致系统比传统(非微波)合成快30倍,比其他替代技术快5倍,比第一代微波系统快80%以上。
自由蓝的可行性论证
的能力自由蓝胸腺肽(SDAVDTSSEITTKDLKEKEVVEEEN-NH2)具有β-支链侧链,ABC 20-聚体(VYWTSPFMKLIHEQCNRADG-NH2)除了形成天门冬氨酰亚胺外,还存在Cys和His残基差向异构化的风险。第三个肽是ABRF 1992(GVRGDKGNPGWPGAPY)显示δ-内酰胺形成的风险。
这些肽的合成是在传统(非微波)系统、第一代微波系统和采用新的快速微波方法的Liberty Blue中进行的。在每种情况下,合成速度都有所提高,产生的肽合成速度更快,粗品纯度相当或更好。
传统合成和传统微波合成产生的废物相当,而Liberty Blue在合成过程中产生的废物量非常少(表1)。
表1.自由蓝的肽合成结果
肽 |
Liberty Blue合成时间(%)比1快圣发电机(MW/conv) |
Liberty Blue溶剂/试剂废物(减少百分比) |
自由蓝粗纯度(%) |
胸腺肽 |
2:20 (85/95) |
344毫升(85) |
60 |
ABC 20美圆 |
2:15 (81/94) |
248毫升(85) |
70 |
ABRF 1992 |
1:47 (81/93) |
188毫升(86) |
80 |
合成每种肽所需的时间少于2½小时≥ 60%粗纯度。对于所有测试的肽,每个肽产生的废物量低于350mL。在所有情况下,通过将循环时间降低到仅4分钟,缩短了合成时间。在接下来的4分钟中,添加氨基酸和脱保护剂,包括所有必要的耦合步骤。
与传统合成相比,微波合成的肽在大多数情况下具有相当或更好的纯度。胸腺肽的粗纯度提高了1.7倍,从35%提高到60%,而ABC保持了相当的粗纯度(各70%)ABRF 1992的粗纯度提高了1.4倍,从56%提高到77%。图2显示了胸腺肽的示例色谱图。
(A)
(B)
图2。胸腺肽色谱仪示例。A.常规合成和B.微波合成。
结论
CEM通过推出全新的产品,进一步改变了肽的合成自由蓝系. Liberty Blue是唯一一款能够在2小时内合成30-mer肽且产生废物较少的肽合成器。
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35多年来,CEM一直在设计和开发实验室仪器和科学方法(包括微波技术和非微波技术),供世界各地的大公司、著名研究机构和大学使用。
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