表皮生长因子受体变异III (EGFRvIII)是一个常数和肿瘤特异性突变在几种类型的癌症。这使得EGFRvIII抗肿瘤免疫治疗的一个有吸引力的目标。一个EGFRvIII-targeted肽共轭锁眼坚守岗位的血蓝蛋白被认为是肿瘤特异性疫苗。慢Fmoc去利率已经被证明能够影响EGFRvIII肽合成,导致肽纯度降低。本文讨论了微波技术在EGFRvIII多肽合成的影响,主要的应用微波辐射合成的每一步。
试剂
国际提供所有Fmoc氨基酸和肽PCAS Biomatrix提供滑冰场酰胺Chem-Matrix树脂。EMD化学品提供了OxymaPure和N, N-dimethylformamide (DMF),同时提供triisopropylsilane西格玛奥德里奇(TIS),三氟乙酸(组织),哌啶,W, W-Diisopropylcarbodiimide (DIC),和3,6-dioxa-1, 8-octanedithiol (DODT),以及提供VWR乙腈,高效液相色谱级水、醋酸、无水乙醚、二氯甲烷(DCM)。
多肽合成——LEEKKGNYVVTDHC-NH2
杰姆自由自动微波多肽合成仪是用来准备肽在溜冰场酰胺Chem-Matrix树脂(0.52更易/ g)。微波去与哌啶20% DMF进行了两个阶段,最初的30年代和随后的去保护去3分钟75°C。传统去进行相同的试剂在两个阶段的初始去5分钟紧随其后10分钟21°C。
所涉及的低浓缩铀去30年代的初始去跟着两个周期的3分钟75°C。传统的低浓缩铀去需要5分钟的最初的10分钟去后面跟着两个周期21°C。微波耦合反应进行的5倍超额Fmoc-AA-OH比AA / DIC / Oxyma 5分钟在75°C。传统联轴器是用相同的试剂为30分钟21°C。然而,所需的低浓缩铀的耦合双耦合为每个在75°C, 5分钟和传统,每30分钟21°C。四合成EGFRvIII利用状况进行总结在表1。
表1。EGFRvIII制备的合成条件和结果
| 条目 |
去保护 |
耦合 |
合成时间 |
原油纯度 |
| 1 |
Conv |
Conv |
18小时40分钟 |
18% |
| 2 |
Conv |
兆瓦 |
11小时40分钟 |
25% |
| 3 |
兆瓦 |
Conv |
14小时57分钟 |
39% |
| 4 |
兆瓦 |
兆瓦 |
8小时44分钟 |
61% |
Conv =传统,MW =微波
乳沟的30分钟完成肽是利用92.5:2.5:2.5:2.5组织/ H2O /是/ DODT 38°C,紧随其后的是降水和乙醚洗涤的肽。
肽分析和结果
水域中的肽分析Symmetry300 C4列(5µm, 2.1×150毫米)在214 nm的梯度MeCN 5 - 95%与0.1%的甲酸,0 - 25分钟,列加热到40°C。质量分析是使用一个LCQ利用离子阱质谱仪进行配备电喷雾电离(热电子)。
第一个合成EGFRvIII耦合和去反应了在室温下利用传统条件(表1,输入1)。花了大约19人力资源完成对收益率只有18%原油纯度的反应。删除的氨基端低浓缩铀和不完整的最终Fmoc这个合成的关键产品(图1)。
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图1所示。信用证下色谱EGFRvIII合成的一系列条件。(RT =室温,MW =微波)
研究微波辐射的影响在EGFRvIII合成、应用程序下的偶联反应进行的微波能量,而去还在常规条件下进行。合成时间缩短35%以上,但原油肽的纯度略与微波能的应用提高到25%的耦合反应。这个合成显示,合成时间略有减少,但改善原油纯度超过20%至39%。
最后,合成是由应用微波能量耦合和去反应(4)条目。原油纯度提高到61%,缩短合成时间不到一半的传统技术。
结论
EGFRvIII合成进行了在微波和常规条件下,产生一系列原油原料纯度和合成时间的基础上,应用条件。最优结果通过应用微波辐射进行耦合和去反应。尽管微波技术有利于耦合和去反应,逐步合成方法优化表明,微波辐射的使用有一个更重要的影响去反应偶联反应。
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