使用Vi-CELL™XR自动计数树突状细胞

生物技术公司SOTIO正在开发一种独特的活性细胞免疫疗法(ACI)，用于治疗自身免疫疾病和癌症。该公司正在利用免疫治疗平台开发新的药物疗法，并随后改进这些疾病的治疗。

这个创新平台是基于活化的树突细胞(DC)。目前，SOTIO正在开发一种突破性的治疗前列腺癌的药物DCVAC/PCa。为此，对该产品进行的临床研究显示出了有希望的结果。

在这篇文章中Vi-CELL™XR,一种自动细胞计数和活力分析仪，被认为是最终产品DCVAC/PCa的DC计数和活力的质量控制(QC)的合适方法。

评估Vi-CELL™测量精度

Vi-CELL™是一种自动计数方法，其准确性是通过测量操作员内和操作员间CV% (Vi-CELL™XR vs Burker chamber)来确定的。Vi-CELL™的准确性通过已知浓度(1 × 106/ml)的珠粒来测定。在相同的操作条件下，两位操作人员三次测定珠的浓度。为了评估计数精度，将Vi-CELL™方法获得的结果与Burker室获得的结果进行了比较。两种计数方法之间和每次计数之间的变异系数均不超过5%。控制珠的末端浓度相似，并发现在浓度控制手册规定的正确范围0.9x106count/ml - 1.1x106count/ml(图1)。控制珠的末端浓度是通过自动和手动计数技术确定的。

图1所示。精度测试。图片来源:Beckman Coulter

Vi-CELL™XR自动细胞计数的最佳设置

DCVAC/PCa包括各种细胞群，但主要包括淋巴细胞和DC。Vi-CELL™成像系统能够根据细胞的圆形和大小研究不同类型的细胞。因此，建立了淋巴细胞和DC的圆度和直径，以便在Vi-CELL™计数时正确识别DC，防止淋巴细胞进入。使用NIS Elements BR成像软件和尼康™Eclipse显微镜在20倍放大率下分辨两个尺寸参数。

5个DCVAC/PCa批次检测细胞循环度，每个批次检测10个淋巴细胞和20个DC;每个批次的平均圆度被确定，如图2A所示。在评价各类型细胞的圆度时，淋巴细胞与DC无明显差异(P=0.6560;配对t检验)，因此很难根据它们的圆形来描述这些类型的细胞。

图2。DCVAC/PCa中细胞圆度和直径的测定。图片来源:Beckman Coulter

接下来，在19个DCVAC/PCa批次检测细胞直径，每个批次检测10个淋巴细胞和20个DC细胞，如图2B所示。然后，评估两个细胞群的直径，以确定有助于区分DC和淋巴细胞的大小范围，所以在Vi-CELL™计数时，淋巴细胞不包括在内。

使用Vi-CELL™自动计数器验证细胞计数

由于两个细胞群之间的大小分离尚未完全确定，两个大小参数，11.5-30µm和12-30µm，被测试作为潜在的Vi-CELL™树突细胞计数的设置参数。在Vi-CELL™XR分析仪中，通过20个DCVAC/PCa批次的大小参数和Burker室计数，测定DC活力、活DC数量和总DC数量。然后通过配对t检验对Vi-CELL™获得的值与伯克计数值进行评估。这将有助于确定哪个尺寸参数更适合设置为DC识别的Vi-CELL™，并与伯克计数没有太大区别。相反，Burker室和Vi-CELL™XR分析仪的DC计数没有发现主要差异(图3)。

图3。DC计数和生存能力。图片来源:Beckman Coulter

这两个推荐的尺寸参数都适用于Vi-CELL™方法识别DC。然而，与Burker chamber计数相比，11.5-30µm范围内的差异小于12-30µm范围内的差异(图3A和3B)。此外，当对测量值的变化与平均值进行对比时，发现在11.5-30µm范围内的变化更小，且比12-30µm范围的变化更集中于零附近。这表明11.5-30µm范围作为v - cell™DC计数的尺寸参数更准确(图4)。

图4。XY阴谋。图片来源:Beckman Coulter

结论

研究表明Vi-CELL™XR自动细胞计数和活力分析仪适用于DC计数，类似于现有的QC方法Bürker chamber。Bürker chamber和Vi-CELL™XR分析仪获得的DC计数值之间没有发现主要差异。

这些信息已经从贝克曼库尔特公司提供的材料中获得，审查和改编。欧洲杯足球竞彩

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