量化由纳米颗粒引起的细胞毒性欧洲杯猜球平台

纳米颗粒，欧洲杯猜球平台例如碳纳米管（CNT），石墨烯和量子点（QD）具有独特的光谱特征，它们在药物递送和体内成像中都具有精确的应用。这些颗粒可以在欧洲杯猜球平台生物窗口中荧光，从而可以增强灵敏度的更好成像。

石墨烯和CNT具有较高的表面积和良好的光吸收特性，使其成为出色的光热疗法和药物递送剂。但是，这些特性使研究人员难以表征以生物学为中心的纳米材料的毒性。欧洲杯足球竞彩

这是因为这些纳米材料的内在吸收和荧光与在体外细胞毒性测定中使用的荧光和吸收区域重叠。欧洲杯足球竞彩这些方面导致歧义和不正确的结果。此外，当将纳米颗粒组合在一起时，其毒性，欧洲杯猜球平台荧光和吸收特性会发生显着变化。但是，这些变化在单独溶解的材料中不太明显。欧洲杯足球竞彩

因此，已知与非聚集的汇总相比具有全身偏见的毒性研究。本文展示了贝克曼·库尔特（Beckman Coulter）的Optima Max-XP超级离心尺寸如何用于减少去除组合纳米管所花费的时间。它还描述了vi细胞XR细胞活力分析仪从贝克曼·库尔特（Beckman Coulter）可以使用单壁碳纳米管（SWCNT）来确定细胞毒性。

碳纳米管制备

将SWCNT与10ml水中的SWCNT与0.2％1，2-二甲基酰基 - 甲基乙醇胺 - 甲基 - 甲基 - 甲基二基乙二醇（DSPE-MPEG，5 kDa分子量）组合。这样获得的溶液将浴浴持续半小时，然后使用已建立的程序进行了充分分散的碳纳米管。

接下来，通过TLA-1220.2转子在Optima Max-XP超级分离场中，将5ML SWCNT溶液在聚碳酸酯离心管中离心，即Beckman Coulter P/n 343778，以22°C的温度和55,000 rpm的速度为55,000 rpm（图1）。然后，收集了650µL的上清液，并用10 kDa，Amicon Ultra Ultra 0.5ml 0.5ml Centrifugal Filters和Beckman Coulter的Microfuge 20 Microfuge 20 Microfuge 20 Microcentrifif，将超速离心的SWCNT（UCF’D SWCNT）和无脱胶SWCNT（AS-MADE SWCNT）浓缩。

使用46.5 l/g*cm和UV-VIS-NIR分光光度计的808nm的SWCNT的质量灭绝系数，确定浓度。随后，将AS型SWCNT和UCF'D SWCNT用去离子水稀释至0.06mg/ml，0.3mg/ml和0.6mg/ml。

图1。无离心的SWCNT（a）的光学图像和（b）在55,000 rpm（〜131,000 x g）的情况下进行超速离心两分钟。图片来源：贝克曼·库尔特

毒性测定

MCF-7乳腺癌细胞用于毒性测定（图2）。使用900µL RPMI/10％FBS（Invitrogen）在24小时的24小时内，将这些细胞以0.08 x 106的孔在24孔板中铺板。纳米管后来添加到井板上。其中一种井用于确认细胞的生存力和生长。

图2。与SWCNT孵育24小时后，在光学显微镜下成像MCF-7细胞。这些细胞与0.06mg/ml AS-MADE SWNT（左图）或0.06mg/ml超速离心的SWNT（右图）孵育，尚未达到汇合。图片来源：贝克曼·库尔特

第二天，将100µL的SWCNT样品引入了井中。总体而言，有六个SWCNT组（n = 2/组）和三个表面活性剂缓冲液对照组（n = 2/组），如下：

• 0.06 mg/ml ucf’d swcnts
• 0.06 mg/ml asmade swcnts
• 0.03 mg/ml ucf’d swcnts
• 0.03 mg/ml AS-MADE SWCNTS
• 0.006 mg/ml ucf’d swcnts
• 0.006 mg/ml AS-MADE SWCNTS
• 0.2 mg/ml dspe-mpeg
• 0.02 mg/ml dspe-mpeg
• 0.002 mg/ml dspe-mpeg

接下来，仅将100µL DSPE-MPEG引入了井中，该样品用作对照。在这里，对照1（n = 1）具有未接触的细胞，对照2（n = 1）的未污染水100µl。经过24小时后，用PBS清洁井，进行胰蛋白酶化，然后在1ML的PBS中合并，以在VI细胞XR细胞生存能力分析仪中进行计数。

随后，在VI细胞XR软件中产生了新鲜的细胞类型，以减少集体纳米管的计数。最后，利用可行细胞的百分比来比较两种溶液中细胞的差异和活力（图3）。

图3。在所有浓度下，超速离心的SWCNT（由UC指定）具有最小的毒性。孵育24小时后，有75％或更多的MCF-7细胞保持可行。相反，未离心并包含聚集物的SWCNT（由Ag指定）对MCF-7细胞的毒性增加，随着浓度的增加而定。图片来源：贝克曼·库尔特

结果和讨论

在此分析中，详细研究了含有可见骨料的AS的毒性。该信息代表大多数纳米颗粒。欧洲杯猜球平台SWCNT分为两组：一组是制造的，其中没有预先纯化步骤去除聚集体，并且在第二组中，在贝克曼·库尔特（Beckman Coulter）的Optima Max-XP超速离心过程中进行了超速离心。

尽管离心程序可有效去除聚合的纳米颗粒，但冗长的离心时间可能会阻碍研究工作流程。欧洲杯猜球平台相比之下，新的超速离心技术显示了超速离心的速度在实现相同的单个溶解的SWCNT和与较长离心时间的生物相容性方面有效的速度如何，但在一小部分时间（图4）。

物品	直径（NM）	多分散性（NM）	Zeta电位（MV）	PALS细胞温度（°C）
超速离心的SWCNT	100.0	28.5	-24.18	25.0
原始的swcnt	239.7	68.4	-23.54	25.0

图4。SWCNT在表面活性剂中超声处理后仍然有许多聚集物种。由Delsamax Pro上的动态光散射确定的尺寸分布显示了两个宽物种（红线）。第一个尺寸范围代表单独溶解的碳纳米管。第二种主要包含聚集的碳纳米管，其直径峰值接近一微米的大小。图片来源：贝克曼·库尔特

与动态光散射和光学图像有关的数据表明，通过高速超速离心去除所有聚合的SWCNT。得益于VI细胞XR细胞活力分析仪，有可能获得毒性数据，否则这些数据将无法使用标准MMP和MTT毒性测定获得。

在这项研究中，与超速离心的SWCNT相比，聚集体表现出高水平的毒性。这可能是由于较大的聚集SWCNT和表面活性剂覆盖率较差。聚集的SWCNT具有更多的无表面活性剂表面，并且这种高表面可用性在增加的活性氧中起关键作用。

另外，类似或汇总的SWCNT要大得多，并且这种增加的大小会中断细胞作用，从而防止细胞生长。为了克服这个问题，应在体内或体外研究中使用聚集的纳米颗粒。欧洲杯猜球平台

结论

贝克曼·库尔特（Beckman Coulter）提供粒子表征和离心工具，可有效地用于量化纳米颗粒引起的细胞毒性。欧洲杯猜球平台这些仪器减少了去除聚合颗粒并增强纳米技术工作流程所需的时间。欧洲杯猜球平台

该信息已从贝克曼·库尔特（Beckman Coulter，Inc。）提供的材料中采购，审查和调整 - 粒子表征。欧洲杯足球竞彩

有关此消息来源的更多信息，请访问贝克曼·库尔特公司（Beckman Coulter，Inc。） - 粒度表征。