电荷和相互作用分析用于预测抗体制剂的稳定性

中等弱静电相互作用的复杂排列驱动蛋白质的胶态聚集。通过表征蛋白质的净电荷和非特异性相互作用(非理想性)，可以估计其聚集的倾向，并了解其在特定配方中的粘度和溶解度特性。

的怀亚特默比乌斯能够在一个自动化实验中测量蛋白质的电荷和非理想性。

非理想性可以由扩散相互作用参数k来建立_D，而电荷可由电泳迁移率确定。的默比乌斯用相分析光散射(PALS)定量大分子的电泳迁移率，用动态光散射(DLS)测量k_D．

DLS还提供了半径(r_h）因此，可以使用Deye-Henry-Hückel公式从半径和移动性计算净电荷：

其中η代表溶液粘度，κ是逆行的长度和f₁是亨利的功能。Debye-Henry-Hückelimpt通常表示胶体稳定性，如表1所示。

表1。有效电荷和Debye-Henry-Huckel电荷及相应的蛋白质稳定性预测。汤姆劳博士提供，生物分子相互作用技术中心，新罕布什尔大学。

Z有效的	ZDHH	胶体稳定性
0到0.5	0到1.5	混凝/絮凝
1到3	3 - 9	初始不稳定
3到4	9到12	温和的稳定
4到6	12到18	良好的稳定性
> 6.	> 18.	优异的稳定性

虽然电荷可以偶尔用作蛋白质稳定性，溶解度和粘度的独占预测因子，第二种蛋白质稳定性指示剂，扩散相互作用参数（K_D)用于理解蛋白质表面发生的其他现象引起的残留相互作用。

DLS.，与第二维里系数B₂₂,或者一个₂用多角度静态光散射量化。第二个维里系数是非特异性溶质相互作用的测量，包括范德瓦尔斯相互作用、偶极子-偶极子相互作用和疏水效应。

一个积极的₂或K._Dvalue表示无吸引力的交互，a为负₂或K._D价值显示了吸引人的互动。吸引的相互作用通常反映了蛋白质的稳定性差，因为聚集可能是由这些相互作用引起的。缓冲液盐度、赋形剂和pH值影响这些相互作用，因此它们的测量是开发配方的重要工具。

k_D由扩散系数(D)与浓度(c)的线性拟合计算如下:

d = D.₀(1 + k_直流+ ...）

的默比乌斯进行并发，独立的PAL和DLS测量，使其成为蛋白质表征的合适工具。

在此分析中，充电和k_D比较两种抗体。在许多条件下被认为是稳定的，另一个具有差的稳定性。

欧洲杯足球竞彩材料和方法

安捷伦1260高效液相色谱法与aWyatt.atlas™和默比乌斯为了满足这些实验的完整自动化。借助于自动进样器将样品置于Mobius流动电池中，随后借助于Atlas附件加压样品室，在执行移动性测量时防止电解气泡的发育。使用Dynamics软件收集所有数据。

用10 mM NaCl, 10 mM组氨酸，pH 6.7，样品透析到配方缓冲液中。蛋白1和蛋白2的抗体浓度均在2 ~ 10mg /mL之间。

使用动态软件，仅执行仅DLS的自动测量，然后进行每个浓度的并发DLS和PALS测量。在施加电流之前测量DLS以确保样本的行为不受当前的影响。

用扩散系数与浓度的关系来确定k_D对于两种抗体，测量平均电荷。

结果与讨论

对于两种抗体的平均电荷几乎相同：蛋白质1和蛋白质2的蛋白质2和蛋白质2（图1和2），证明两种抗体可以预期显示“初始不稳定”（表1）。

图1所示。蛋白1的代表性迁移率图显示迁移率数据(o)，适合和当前(Δ)。

图2。用于蛋白2的代表性迁移率图示出迁移率数据（O），配合和电流（δ）。

相反，蛋白1稳定性较差，蛋白2稳定性较好，所以电荷相似是意料之外的。在这种情况下，k_D测量提供了关于这些抗体的解决方案行为的重要数据。

如图3和图4所示，蛋白1的k值为负_D，而蛋白质2有一个正的k_D;蛋白质1的负k_D解释了它形成聚集体的倾向。

图3。扩散系数作为蛋白1浓度的函数。斜率除以y轴截距得到k_D值-1.9 x 10-2ml/mg。

图4。扩散系数作为蛋白质2的浓度。斜率除以Y-截距，产生K._D值7.5 x 10-2ml/mg。

结论

电荷和扩散相互作用参数是至关重要的，因为它们揭示了胶体的稳定性，但电荷本身不能总是提供影响稳定性因素的全面图片。虽然净电荷的存在提供了稳定性，但分子可以拥有有利的净电荷，但当暴露于局部静电(如偶极矩和疏水残基)时，分子可能变得不稳定。

的怀亚特默比乌斯设计具有衡量k的独特能力_D在一个自动实验中充电。这种能力提供了影响蛋白质稳定性的因素的高度全面的图片比任何一个单独的测量。

参考

“由CG-MALS量化的”胰岛素自我关联“，由CG-MALS定量Wyatt技术。图表和插图用Wyatt技术的许可转载。'

这些信息的来源、审查和改编来自怀亚特科技提供的材料。欧洲杯足球竞彩

有关此来源的更多信息，请访问怀亚特的技术。