使用浓缩物2分析牛γ球蛋白

近年来，红外光谱技术由于其对生物系统的高信息量而被公认为一种实用的蛋白质结构分析方法。红外光谱技术在蛋白质展开分析中的应用日益受到人们的关注。

已经广泛地分析了蛋白质展开过程，例如圆形二中色，荧光或可见吸收光谱。然而，红外光谱是一种独特的方法，可以通过在其他方法无法实现的时间尺度上通过二级结构改性来分析蛋白质展开过程，同时保持高度的结构分辨率。

已经建立了易于样品制备和高采样率的总反射率（ATR）作为测试蛋白质的有利红外方法。Harrick EppertAtir2™是一种多反射ATR附件（图1），设计用于在足够小的时间内检查少量液体，以有效分析蛋白质展开过程。

本文分析了EplectAtir2™的应用，以测试由于热扰动引起的二次结构改变的少量蛋白质。

图1。Harrick Eppertir2™多反射ATR配件

实验

在本研究中检查了BGG蛋白质测定标准的展开。溶液包括0.9％氯化钠溶液和叠氮化钠的750ug / ml BGG的混合物。使用在市场上市售的FTIR光谱仪进行测量并配有MCT检测器和KBR束分离器。使用多反射硅ATR元件来配置ChentrectAtir2™。

图2。在将样品注入细胞后，在100℃下在100℃下的ATR光谱在100℃下在100℃（最低峰），1,2,3,4,5,6,6,8,9,9,20和30分钟（最高峰）分钟。

数据在4000 - 650厘米的波长范围内^-1收集了。数据收集参数如下：

孔径设定为100％，增益设定为八个，扫描数为64，分辨率为4厘米^-1。EptigleAtir2™与其加热的液体电池连接，通过哈里克温度控制器调节。在整个数据收集过程中，加热电池的温度保持在100℃。

在100℃下剩余恒定的温度，通过注射器通过加热细胞上的鲁尔配件注射蛋白质样品。装载了足够的样品以确保细胞内部完全填充。将光谱立即注射到细胞中，然后每分钟收集9分钟。检查后两种额外的光谱在检查后运行20和30分钟。在数据收集期间盖住电池配件以避免蒸发。

结果

收集的光谱表现出与彼此相对于彼此相关的生动光谱变化，表明由于环境温度的显着尖峰，发生蛋白质展开。特征酰胺I频段的改变约1600-1700厘米^-1是主要的焦点。

在该区域中，峰值提供有关蛋白质骨干结构的最大数据，这是蛋白质二级结构的主要决定因素。在该地区内，随着时间的推移，注意到吸收波长和吸收波长的伴随的增加。

波长最大，最引人注目的变化 - 从大约1670厘米的偏移^-1到1620厘米^-1- 在注射时间（T = 0）和注射后1分钟之间见证（T = 1）。相反，在此期间，吸收强度并没有大大改变。这表明在将蛋白质暴露于加热之后，可以发生大部分二次结构变化。

随着时间的推移，光谱似乎逆转了吸收的初步趋势，但在峰位置保持相当恒定。从两分钟的每分钟获取的光谱表明吸收增加，但每次通过分钟略微减少。

将这些与在此时段之外收集的光谱（T = 20和T = 30）进行比较，可以更好地了解在长期内的蛋白质展开。这些以后的光谱在酰胺I区域中的强度和峰位置几乎相同，表示不会在特定时间段内大大修改蛋白质构象。

这些结果为未来的研究产生了可能涉及使用的潜力ConcentratIR2™为了产生与热诱导蛋白质展开相关的二次结构变化率的高度全面的概况。

由加热引起的基础蛋白质构象的改变导致二次结构组合物中的某些已知的改变，其在红外线中产生特征峰。酰胺I频带由重叠的部件带构成，其模仿特定的二次结构，例如α螺旋，转弯，β纸和随机结构。

在酰胺I区域内，球状蛋白质可能会产生与特别β-和α螺旋相对应的突出条带。这些乐队在波数不断下降约1660厘米^-11620 - 1640厘米^-1对于α螺旋和β纸，分别基于所讨论的特定蛋白质可以进行轻微变化。

分析T = 0光谱显示出明显的α螺旋峰，从1670到1650厘米^-1;虽然β床单有最小的贡献。如前所述，二级结构中最重要的变化似乎发生在从T = 0到T = 1的转变中发生。

基于该转变，前面提到的α螺旋峰值的显着消失，并且具有大约1620-1640厘米的主要β板峰的伴随外观^-1，这表明总的二级结构组成已转变为大部分β片，并与另一项红外研究的结果相吻合，该研究也见证了热扰动后β片的增加和α螺旋的减少。

结论

本文讨论了简单和效率ConcentratIR2™可以以少量的蛋白质如BGG，可视化热诱导的二次结构改变。上述结果表明，与其他蛋白质可视化的其他技术相比，IR光谱可以达到高水平的结构细节，特别是在与蛋白质展开连接的结构中记录分钟的改变。

这些信息已采购，从哈里克科学产品（Inc）提供的材料中审核和调整欧洲杯足球竞彩

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