HPLC -光化学柱后衍生法测定真菌毒素

黄毒素是由真菌作为次级代谢物产生的最佳已知的霉菌毒素，主要由Aspergillus Parasiticus和Aspergillus flavus，以及其他菌株的程度较小。这个起源也是曲霉属毒素毒素的名称源自。

黄曲霉毒素可能在田间或农产品储存期间产生，特别是在高湿度和温暖的条件下。不幸的是，这些物质可以持续很长时间，甚至在真菌被杀死后，从而污染食物。

大多数真菌毒素是稳定的化合物，在烹饪或食品加工过程中不会被破坏。尽管黄曲霉毒素的数量巨大，但只有有限的数量在(分析)实践中有意义。

黄曲霉毒素B₁广泛存在于食品和饲料产品中，如棉籽、玉米和花生。它具有极高的毒性，被世界卫生组织列为第一类致癌物。黄曲霉毒素B₂G₁和G.₂B₁，在污染样品中的较低浓度。毒性的顺序是AFB1> AFG1> AFB2> AFG2。¹

赭曲霉毒素A (OTA)是由多种曲霉和青霉形成的霉菌毒素。OTA可以在植物生长过程中产生，但通常是在食物转化和储存过程中产生的。⁴脱氧雪腐镰刀菌醇(DON)是一种由特定镰刀菌种产生的霉菌毒素，经常在储藏或田间侵染水稻、大麦、燕麦、小麦、玉米和其他各种谷物。

人类的暴露风险是间接的，通过动物来源（鸡蛋，牛奶，肝，肾）或直接通过植物来源的食物（谷物）的食物。它已被发现在Trinthee，高粱，荞麦等其他食品，如啤酒，麦芽，煎饼，爆米花，婴儿食品，面条，早餐谷物，面包和面粉。

唐影响人类和动物健康导致头晕，头痛，腹痛，腹泻，呕吐，急性临时恶心，发热。^3.玉米赤霉烯酮(ZON)是一种镰刀菌属真菌毒素，主要在食品和饲料中产生。开发有效的鉴定和定量分析方法非常重要，因为真菌毒素很容易进入市场，并可能对公众健康构成风险。这些方法被政府机构和健康保护机构用于大规模监测商业动物饲料和食品。在良好的加工工业中，同样的方法被用来检查原材料和产品，以便将它们导向有适当立法的国家。欧洲杯足球竞彩⁵

图1所示。确定的黄曲霉毒素的化学结构。

世界各国都在控制黄曲霉毒素B的存在₁B₂G₁和G.₂在很多未加工和加工的食品中图1描述了美国食品和药物管理局设定的行动限制(FDA将采取法律行动将产品从市场上撤下的水平)。图2 - 5显示了欧盟委员会根据EG 1881/2006规定的ZON、OTA、DON和黄曲霉毒素最高水平的限值^5,6．

图1。用于人类食品，动物饲料和动物饲料成分的FDA作用水平⁵

有可能的使用	谷物、谷物副产品、饲料或其他产品	黄曲霉素水平(µg /公斤)
人类消费	牛奶	0.5
人类消费	食品，花生和花生产品，巴西和开心果	20.
未成熟的动物	玉米，花生产品和其他动物饲料和成分，不包括棉籽餐	20.
乳制品动物，上面未列出的动物，或未知用途的动物	玉米，花生产品，棉籽等动物饲料和成分	20.
种牛、种猪和成熟家禽	玉米及花生制品	100.
完成猪100磅或更大的重量	玉米及花生制品	200.
育肥(即饲养场)肉牛	玉米及花生制品	300
牛肉、牛、猪或家禽，不论年龄或繁殖状况	棉籽用餐	300

图表2。欧盟委员会设定的食品中唐的最高水平⁶

食品	最大水平[μg/ kg]
除了杜兰姆小麦，燕麦和玉米以外的未加工谷物	1250
未加工的杜兰姆小麦和燕麦	1750
未加工的玉米	1750
供人类直接消费的谷物、谷物面粉(包括玉米粉、玉米粉和玉米粉)、供人类直接消费的成品麸皮和胚芽	750
意大利面(干)	750
面包(包括小型烘焙食品)、糕点、饼干、谷类食品和早餐麦片	500.
加工过的谷类食品和婴幼儿食品	200.

图3。欧洲委员会规定的食品中某些污染物的最高水平⁶

食品	最大黄曲霉毒素水平[μg/ kg]
	B1	B1 B2 G1 G2的和
花生在人类食用或用作食品配料前，须经过分类或其他物理处理	8.0	15.0
在人类食用或用作食品配料之前，坚果须经过分类或其他物理处理	5.0	10．0
林木和坚果及其加工产品，用于直接人类食用或用作食品中的成分	2.0	4.0
在人类食用或用作食品配料前，经分类或其他物理处理的干果	5.0	10．0
干果及其加工产品，用于直接人类食用或用作食品中的成分	2.0	4.0
所有谷物和谷物源自谷物的所有产品，包括加工谷物产品	2.0	4.0
玉米在人类食用或用作食品配料前须经过分类或其他物理处理	5.0	10．0
用于制造牛奶产品的原料牛奶，热处理的牛奶和牛奶	-	-
以下香料种类： 胡椒(胡椒属水果，包括白胡椒和黑胡椒)，肉豆蔻(肉豆蔻)，生姜(生姜)，姜黄(姜黄)	5.0	10．0
加工过的谷类食品和婴幼儿食品	0.10	-
婴儿配方和后续配方，包括婴儿牛奶和后续牛奶	-	-
专门用于婴儿的特殊医疗目的的饮食食品	0.10	-

图4所示。欧盟委员会设定的食品中OTA的最高水平⁶

食品	最大水平[μg/ kg]
未加工的谷物	5.0
所有来自未加工谷物的产品，包括加工谷物产品和谷物，用于直接人类消费	3.0
干葡萄果（醋栗，葡萄干和苏丹斯）	10．0
烘培咖啡豆和磨碎的烘培咖啡，不包括可溶性咖啡	5.0
溶性咖啡(即溶咖啡)	10．0
葡萄酒(包括起泡酒，不包括利口酒及酒精浓度不低于15% vol的葡萄酒)及果酒	2.0
芳香葡萄酒，芳香的葡萄酒饮料和芳香葡萄酒 - 产品鸡尾酒	2.0
葡萄汁，浓缩葡萄汁，葡萄花蜜，葡萄汁和浓缩葡萄汁，供人直接食用	2.0
加工过的谷类食品和婴幼儿食品	0．50
专门用于婴儿的特殊医疗目的的饮食食品	0．50
绿色咖啡，干果除了干藤蔓水果，啤酒，可可和可可产品，利口酒葡萄酒，肉制品，香料和甘草	-

图5所示。欧盟委员会设定的食品中Zon的最高水平⁶

食品	最大水平[μg/ kg]
玉米以外的未加工的谷物	100.
未加工的玉米	200.
供人类直接消费的谷物，谷物面粉，作为终端产品销售给人类直接消费的麸皮和细菌	75.
供人类直接食用的玉米、玉米粉、玉米粉、玉米粉、玉米胚芽和精制玉米油	200.
面包（包括小面包店），糕点，饼干，谷物零食和早餐谷物，不包括玉米小吃和玉米的早餐谷物	50.
玉米零食和玉米早餐谷物	50.
加工谷物的食物（不包括加工玉米食物）和婴儿和幼儿的婴儿食品	20.
加工玉米食物为婴儿和幼儿	20.

理论:推荐样品制备

除了取样和研磨程序，黄曲霉毒素分析的传统技术还包括提取步骤，通过固相萃取(SPE)对样品进行清理高效液相色谱法（HPLC）。然而，由于耗时的提取和清理步骤，该技术限制了采样吞吐量。图2概述了过度毒素分析中使用的一般步骤。

图2。黄曲霉毒素测定的一般分析程序。

方法参数

黄曲霉毒素B₁和G.₁很难检测，因为它们只显示极小的荧光。用254nm的紫外光照射黄曲霉毒素B₁和G.₁通过光诱导羟基化，然后通过荧光光谱更灵敏地测量。

柱子	EUROSHER II 100-3 C18,250 x 4 mm id与precolum
洗脱液的	水
洗脱液B	乙腈
梯度	时间[min]	%的	% B
	0．00	60.	40
	6.00	60.	40
	6.50	20.	80
	10.00	10	90
	11.00	10	90
流速	1.5毫升/分钟
注入量	5µl
列温度	40°C
紫外检测	220 nm（20 Hz）
盛名的检测	Ex 329 nm Em 460 nm （5 Hz，0.1秒，灵敏度：高，增益16） 用uve光化学反应器在100μA时衍生柱衍生化

结果

与FLD色谱图邮报的专栏里衍生化使用UVE电抗器如图3所示。图4显示了在未检测到DON的相同运行的父DAD色谱图。分离效果良好，在Eurosher II 100-3 C18列上。峰是基线分离，也表现出良好的形状。

图3。用UVE光化学反应器柱后衍生分析霉菌毒素的FLD色谱图

图4。用于220nm的爸爸色谱图，用于使用uve光化学反应器进行霉菌毒素分析进行​​柱柱衍生化

结论

Don，Zon和4岁的黄曲霉毒素B.₁B₂G₁和G.₂使用uve光化学反应器在单个色谱运行中检测到用于柱柱衍生物的柱衍生物，与EuroSher II C18列耦合，Azura分析HPLC系统。有必要进一步阐明OTA的测定。

其他物质的分析不受影响，因为这种柱后衍生化方法的流动相没有改变。光化学反应器易于操作，因为不需要额外的衍生化化学品。这种应用为真菌毒素的测定提供了一种简单的替代方法。

有关更多信息，请参阅白皮书

推荐列的物理属性

固定阶段	欧洲II 100-3 C18
USP代码	L 1
孔隙大小	100Å.
孔隙体积	0.8 ml / g
具体表面	320±20米2/ g
粒子尺寸	3μm
形式	球形
% C	16
结束描述	是的
维	250 x 4 mm ID带预柱
订单号	25 we181e2g

推荐仪器

描述	订单号
p6.1 l，二元HPG泵，5毫升泵头	APH35GA
爸爸6.1升	ADC11
CT 2.1	A05852
在3950年	A50070
荧光检测器RF-20轴	A59201
LCTech UVE光化学反应器	A07547

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参考资料及进一步阅读

1.通过液相色谱法测定荧光检测的衍生反应，用荧光检测，W.Th。Kok，Chrositography B，659（1994）127-137 2

2.http://www.eurofins.de

3.Deoxynivalenol and its toxicity, Pavlina Sobrova,1 Vojtech Adam,1 Anna Vasatkova,2 Miroslava Beklova,3 Ladislav Zeman,2 and Rene Kizek13 brackeho 1-3, CZ-612 42 Brno, Czech Republic(捷克共和国欧洲杯线上买球

4.毒性，发生，新陈代谢，排毒，解毒，法规和摄入量：Zearalenone的毒性毒素，Zinedine A1，Soriano JM，MoltóJC，MañesJ.，1个食物毒理学实验室，国家健康研究所（INH），BP 769 Agdal，27大道Ibn Batta，Rabat，摩洛哥

5. FDA霉菌毒素监管指导，国家粮食和饲料协会1250只眼ST.，N.W.，Suite 1003，华盛顿州，D.C.，20005-3922 2011年8月

6.委员会监管（EC）2006年12月19日第1881/2006截至1981/2006，为食品中某些污染物的最高水平，欧盟官方杂志，L 364/5 - L 364/24,20.12.2006

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