用折光指数检测器测定甘露糖和甘露寡糖

葡甘油甘油甘油胺是葡萄糖和甘露糖的分枝多糖。它们在几个植物中被发现为能量储备。高量的葡糖甘油甘油甘油甘油甘油系在康国根(魔芋konjac)中被发现。

从Konjac Root发现的面粉中发现胆固醇降低等营养益处。因为它具有刺激肠道友好的细菌的能力,它被称为益生元1.益生元是一种选择性发酵成分,其能够在胃肠道微生物中的活性和/或组合物中能够赋予宿主健康和健康的活性和/或组合物。2

益生元是一种特定的功能性食物。寡糖有益于它们可以忍受整个胃肠道过境并达到胃肠道细菌3..与纯葡甘露霉甘油南甘露甘露甘露甘露甘露甘露甘露甘露甘露甘露甘露甘露甘露聚糖相比,葡甘露霉甘油蛋白的部分水解产生葡糖胺酸钙,其呈现出更好的益生元函数。

聚合度为5的葡寡糖的益生元效应优于聚合度为10的葡寡糖4..因此,部分酶解具有重要意义5..液相色谱是一种选择在裂解后试验样品的一种选择,并近似聚合度和组合物。

Azura Rid 2.1L.测试了其量化限制(LOQ)。knauer eurokat na+还测试了柱的能力,其将具有大于2的聚合程度的糖类分割。用甘露寡糖和甘露糖的混合物用作试验基质,因为这些寡糖可作为水解产物的参考。

被测糖类的化学结构(由Megazyme公司提供)

图1。被测糖类的化学结构(由Megazyme公司提供)

实验

样品制备

6种糖的标准溶液为12 mg/ml2O.DD..制备所有六种糖类的混合物,每种糖浓度为2mg / ml并通过45μm过滤器通过。从该标准混合物中,为校准点进行八个1:2稀释步骤。

最终浓度为:2mg / ml;1 mg / ml;0.5 mg / ml;0.25 mg / ml;0.125 mg / ml;0.0625 mg / ml;0.03125 mg / ml;0.015625 mg / ml;0.0078125 mg / ml。糖类购自甲唑.

方法参数

柱子: Eurokat Na.+,300 x 8 mm,10μm
洗脱液A: H2O.DD.
流速: 0.5毫升/分钟
注射体积: 10µl
柱温: 75°C
系统压力: 50巴
检测: ri.
运行时间: 16分钟

测量了新KNAUER AZURA RID 2.1L的LOQ,并与KNAUER Smartline S2300 RI探测器进行了比较。KNAUER Eurokat Na+用柱用于分离糖类的混合物,其用作试验基质。

制备从2mg / ml到0.0078125mg / ml开始的一系列稀释液,并测量混合物的每种糖的校准曲线。

结果

图2显示了使用Eurokat NA分离的甘露糖,甘露糖,甘露糖,甘露翅膀,甘露糖和甘油酶的混合物+柱子。曼诺斯,甘露糖和甘露糖是基线分裂。Mannotetraose几乎是基线分开,而甘露冬季糖尿和曼泊糖的峰未分开基线(图2)。

使用Smartline RI检测器S2300,该混合物的色谱图显示了类似的分离(数据未显示)。

分离糖混合物,每2mg / ml,Eurokat Na + 300×8mm。

图2。分离糖混合物,每2mg / ml,Eurokat Na+300 x 8 mm。

测定并使用智能线RI检测器S2300和Azura RID 2.1L测定六种测试糖的LOQ。确定噪声并使用图3中所示的校准图基于峰值高度计算的LOQ。

AZUAR RID 2.1L检测到的所有糖类的loq明显低于Smartline RI检测器S2300检测到的loq(图4)。

测定并使用智能线RI检测器S2300和Azura RID 2.1L测定六种测试糖的LOQ。确定噪声并使用图3中所示的校准图基于峰值高度计算的LOQ。

AZUAR RID 2.1L检测到的所有糖类的loq明显低于Smartline RI检测器S2300检测到的loq(图4)。

所有六种测试糖的校准图,具有线性度R2的指示

图3。所有六种测试糖类的校准图,具有线性度r的指示2

Azura RID 2.1L(黑条)和智能线RI检测器S2300(白色条)对六种测试糖类的LOQ值进行比较

图4。Azura RID 2.1L(黑条)和智能线RI检测器S2300(白色条)对六种测试糖类的LOQ值进行比较

Smartline RI检测器S2300的定量限在65µg/ml到35µg/ml之间,而AZURA RID 2.1L的定量限在20µg/ml到8µm/ml之间。

Azura RID 2.1L的LOQ被确定为比智能线RI检测器S2300的LOQ低20%至38%,这是一个相当高的灵敏度(图5)。

表1显示了所有测量的糖的总LOQ值。测量相对标准偏差(RSD)值,用于在每种糖的15.6μg/ ml的40℃重复的峰值高度。用除去2.1L测量的测试糖计算的%RSD值在0.52%和3.33%之间,智能线S2300在2.52%和7.61%之间。

这些结果强调了在低样品浓度下更准确的测量,并增加了AZURA RID 2.1L的灵敏度。

智能线RI探测器S2300和Azura RID 2.1L所有六种糖类的LOQ比例

图5。智能线RI探测器S2300和Azura RID 2.1L所有六种糖类的LOQ比例

表格1。比较AZURA RID 2.1Land Smartline RI S2300在1:128稀释步(15.6 g/ml)下测定的所有糖的总计算限和%RSD(峰高)

糖类 掉2.1升 S2300.
LOQ INμg/ mL RSD(高度)为15.6 g/ml LOQ INμg/ mL RSD(高度)为15.6 g/ml
甘露糖 20.35 1.67 67.72 6.74
Mannobiose 15.82 3.33 50.39 7.61
mannotriose. 14.09 2.11 43.49 6.38
mannotetraose. 8.77 0.58 4022 5.30
Mannopentaose. 12.79 1.07 36.93 5.66
曼诺己糖 14.15 0.52 36.29 2.52

结论

A Knauer Eurokat Na+用柱分离了六种糖的混合物。甘露糖、甘露糖、甘露二糖和甘露糖为基线分离。新Knauer Azura Rid 2.1L用于检测并基于10至20μg/ mL之间的糖的LOQ。Azura RID 2.1L比SmartLine RI探测器S2300更敏感的4.5倍。

Azura riv 2.1l结合Eurokat Na+色谱柱是分离和鉴定聚合度在2 - 5之间的低聚糖的特殊工具。浓度可以测试特定的糖,低至10µg/ml。

Eurokat Na.+适用于糖低聚物的分裂。

有关更多信息,请参阅白皮书

推荐栏的物理性质

固定阶段 磺化交联苯乙烯 - 二乙烯基苯苯甲苯,钠形式
颗粒大小 10µm
形式 球形
十字链接% 6.
方面 300 x 8毫米
订单号 30GX210EKN.

推荐栏的物理性质

推荐的仪表

糖类的分析需要配有自动进样器,柱烘箱,脱碱剂和折射率检测器的等级HPLC系统。还可以提供其他配置。

描述 订单号。
AZURA P 6.1L第四系高效液相色谱泵,不锈钢10ml APH34EA
Azura Rid 2.1L. ADD31
Azura CT2.1柱温控器 A05852
自动进样器3950. A50070
Azura洗脱托盘E 2.1L AZC00
OpenLab CDS EZChrom版 A2600-1

糖类的分析需要配有自动进样器,柱烘箱,脱碱剂和折射率检测器的等级HPLC系统。还可以提供其他配置。

有关更多信息,请参阅白皮书

参考

1.水解魔芋葡甘聚糖作为益生元的潜在用途。J Sci Food Agric 87:1758-1766 (2007)

2.Roberfroid MB,《益生元:重新审视的概念》。营养科学(3增刊2):830S-7S。pmd17311983(2007年3月)

3.王志强,王志强,等。魔芋葡甘露聚糖寡糖的酶解制备及特性研究[j]。食品化学。59:12658-12666 (2011)

4.陈建,刘D.,施B.,王H.,郑扬,张W.通过响应面法使用β-Mannase从Konjac生产的水解条件的优化使用β-甘露糖酶碳水化合物聚合物93:81-88(2013)

5. Van Zyl W. H. H. Rose S.H.,Trollope K.,GörgensJ.F.Figgalß-甘露糖酶:甘露水解,异源生产和生物技术应用过程生物化学45:1203-1213(2010)

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