用SPECTROstar®Nano测试酒精饮料中的游离氨基氮含量

啤酒的质量分析包括检测游离氨基氮(FAN)，它提供了对蛋白质含量的估计。通常用凯氏定氮法测定蛋白质含量，这种方法昂贵且复杂。酿造行业使用了几十年的另一种标准测定方法是使用比皿的茚三酮FAN测定法。茚三酮可用于检测初级氨基酸，结果呈蓝色，在570 nm处最大吸光度。这里使用的标准是氨基酸甘氨酸。

随后，Starcher和工作人员以及我们的实验室领导减少了标准比皿分析的体积，并使用了多孔格式。体积的减少减少了所使用的昂贵试剂的数量，限制了废物，并使废物处理更简单和更便宜。

BMG LABTECH的SPECTROstar Nano将反应杯和微孔板测量集成到一个仪器中。光谱由集成光谱仪随时间记录，MARS软件显示所有曲线图。

欧洲杯足球竞彩材料和方法

• 清除Greiner的96孔板
• SPECTROstar Nano, BMG LABTECH

标准FAN测定pH值6.8

茚三酮试剂颜色:无水钠₂HPO₄(4 g), KH₂人事军官₄(6 g)、茚三酮(0,5 g)、果糖(0.3 g)溶于100ml蒸馏水中。这种原液可以用琥珀色的瓶子在冰箱中储存长达两周。

甘氨酸标准股票:甘氨酸(107.2 mg)溶解在蒸馏水中，制成100 mL。这可以在0-4°C保存，以防止霉菌生长。

甘氨酸标准溶液：1毫升甘氨酸标准原液用蒸馏水稀释至100毫升最终体积。标准品含2mg氨基氮/L。它应该是新鲜的，为每一天的化验。

稀溶液:将碘酸钾（2g）溶解于600ml蒸馏水中，然后添加400ml 96%乙醇。它在4°C下长期稳定，但应在室温下使用，以防止反应杯上冷凝。

分析:用蒸馏水将一毫升啤酒稀释至50毫升。将两毫升的这种物质放入16个尺寸为150 mm的试管中。添加茚三酮显色剂（1 mL），并在沸水浴中加热松散覆盖的试管16 min。然后将试管转移到冷水浴中，在20 min内将温度降至20℃。然后，添加5 mL稀释试剂，混合，并立即用2 mL水对照空白测量575 nm处的吸光度。

微孔板FAN测定pH 5.5

茚三酮股票的解决方案:将茚三酮(8 g)溶解在300 mL乙二醇中，加入pH 5.5的5 N乙酸钠缓冲液(544 g四水乙酸钠+ 400 mL冰醋酸在1 L水中)。在室温下可以稳定至少6个月。

二氯化锡的解决方案:SnCl₂(500 mg)溶于5ml乙二醇中，室温稳定至少6个月。

茚三酮试剂/工作解决方案:实验前，先用25µL SnCl₂加入每1ml茚三酮原液中，混合均匀。

分析:96孔微孔板中加入2µL(0.4µg N)甘氨酸标准品或2µL啤酒或葡萄汁。然后加入100µL pH为5.5的醋酸缓冲茚三酮试剂。在104°C下加热10分钟。使用SPECTROstar Nano microplate reader，同时测量几个样品在575 nm处的吸光度。

还原体积比色皿FAN测定pH值5.5

分析:到pH 5.5醋酸缓冲茚三酮试剂200µL时，加入30µL啤酒或葡萄汁或20µL(4µg N)甘氨酸标准品，置于沸水浴中10 min，然后去样，加入2.8 mL冷水。这些都是涡旋的，在SPECTROstar Nano中记录了在575 nm处的吸光度与30µL水的空白样品。

控制和计算

所有样品、水样和甘氨酸标准品的检验应进行两到三次。从样品和甘氨酸标准品中减去平均空白值。ppm的风扇内容是通过空白校正样本的平均吸光度除以平均吸光度标准的甘氨酸和乘以2和稀释系数(50对啤酒稀释1毫升100到50毫升或麦芽汁稀释1毫升到100毫升)。所有样品，包括被捣碎的样品，在稀释前应经过过滤或离心处理，无雾霾/碎片)。

结果与讨论

波长优化

使用光谱星纳米的扫描能力，可以确定该分析的最佳波长。记录了茚三酮与甘氨酸或啤酒样品反应的吸光度光谱，仪器显示在570-575 nm处有明显的吸光度最大值(图1)。

图1所示。甘氨酸标准样品(红线)和啤酒样品(绿线)的光谱捕获。

完成FAN测定所需的反应时间

除了前面解释的三种分析外，还研究了另一种pH值为6.8的还原反应杯风扇分析（图2）。不同分析的反应速率不同。标准FAN和rFAN pH 6.8反应至少需要16分钟才能达到最大吸光度，而rFAN 5.5和微孔板FAN分析在8分钟内达到最大吸光度。即使将样品培养20分钟，也没有吸光度损失。

图2。完成4种不同FAN测定所需的反应时间)。

结论

的SPECTROstar纳米非常适合于啤酒样品的FAN微孔板和比皿分析，与旧标准FAN比皿分析相比有几个优点。体积缩小的试管和基于FAN的微孔板使用浓缩的茚三酮溶液，减少了冷却时间，避免了溶液的稀释或淬火。此外，不需要进一步稀释啤酒/麦芽汁样品。

测定的pH值和缓冲液经过了优化，开发的方法应该对一些酿造、酿酒、蒸馏和食品实验室的游离或总可用氮的常规测定有用。

本信息来源、审查和改编自BMG LABTECH Ltd.提供的材料。欧洲杯足球竞彩

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