荧光光谱往往受到严重扭曲。这些在很大程度上是可预测的,是由于浓度内过滤效果(款项)。因此用户的责任评估返回吸光度值与样品的浓度。朗伯-比耳线性要求成立这个然后给。
主内滤效应(论坛)可以看到当激发光吸收组件在示例。这种情况发生之前,达到激发和发射光束路径相交的地方,在这一点上,因此发现荧光可以兴奋。
二级内滤效应(SIF)当上述分割的区域发出的荧光激发和发射光束路径,然后被样品吸收组件之前能够离开细胞,达到发射探测器。
论坛和SIF可能是由于样本组件吸收光线,这可能发生不管这些组件发出荧光。
经常出席任何OD值影响吸光度和荧光区域重叠。
有一系列的研究在机上娱乐系统修正所有这些与制定,然后测试方程处理细胞路径长度,细胞的位置,和梁几何光学系数;后者被定义的焦点属性(焦距比数)的激发和发射光束路径。
这是常见的做法来测量样品的吸光度光谱在这重叠的问题点荧光激发和发射光谱区域的兴趣。在理想情况下,这将是完成的同时,荧光测量同一细胞内,使用相同的工具来帮助减少差异由于样品的状态或几何。
新方法同时生成个人提出了激发和发射光谱,这可以用于所有荧光样品组件同时提供有用的信息组件吸收光线,但没有发出荧光。它也能够提供所需的信息,以便正确样品浓度的荧光光谱机上娱乐系统可能是一个问题。
仪表
在这项研究中,A-TEEM™方法探讨了。这种方法提供了同时吸光度-传输和荧光激发光谱使用专用和专利Aqualog发射矩阵®从Horiba仪器公司。
Aqualog®是一个光具座,特别aberration-corrected激发双光栅单色仪。它还包括一个吸光度检测器,一个参考探测器(硅光敏二极管)和专门发射探测器由摄谱仪和热电的冷却,黑色背景CCD。
这个系统可以在多种增量扫描激发能量水平,从高到低能量的要求。它可以收集并整理完整的发射光谱在每个激励增量,为了快速、同时产生吸收光谱以及完全纠正excitation-emission矩阵或光谱图。
的Aqualog®包括捆绑的软件功能内置工具标准化水的拉曼散射,或者使用硫酸奎宁的发射条件下定义的。此外,修正瑞利屏蔽的影响或包括机上娱乐系统。
这Aqualog®Datastream包允许完全纠正EEM数据的分析和基于多元常规俗称PARAFAC。
当前的应用程序
水的质量
饮用水处理厂主要使用地表水,需要监管。这是因为某些组件内的水可以对有毒消毒副产物的前体(论文)可以与卤代反应消毒剂随着时间的推移,在分销系统。
总溶解有机碳(TOC)是一种常见的组件,可以受到相当大的不可预知的变化模式。这些模式与事件相关联影响零星sourcewater排水的有机材料,例如,融雪或降雨。欧洲杯足球竞彩
我们可以看到这里,Aqualog®一直利用监控溶解有机物与EPA阶段2消毒副产品规则(DBPR2)合规在一个高度典型的水处理厂,把饮用水来自地表水。
相同的原始样品来源和成品水过滤到0.45μm之前分析。此外,这些样本匹配到室温25°C分析之前发生。
在这个例子中,Aqualog®额和吸光度测量条件包括励磁/吸光度范围之间的250和600海里,使用3励磁间隔为3.28 nm发射。它还中获得和2 s集成用于发射检测。
空白样品,用于发射和吸收,是一个密封的,TOC-free水样- Starna 3 q-10——从Starna科学公司。所有3.5毫升的样品进行了分析使用1厘米路径长度suprasil 4路清晰的荧光石英比色皿。
吸引了比较常见的例子似乎和吸光度的原料和成品水样测量相同的日常样本集。
原水额数据显示大约6.25倍的峰值强度高于成品水,以及更广泛的和明显红移主要发射光谱带。
原水的吸光度也显示更高的灭绝在每个波长相比对其成品水。
为了恰当地评估定量的变化与治疗相关的额,PARAFAC分析被应用到每个样本以分解的激发光谱,集中载荷和核心荧光发射光谱组件。
三个关键组件已确定在这个例子:-
- 组件1 (C1)被确定为腐殖质/富啡组件以相对较低的分子量和芳香性。
- 组件2 (C2)被确定为腐殖质/富啡组件与高分子量和芳香性。
- 组件3 (C3)被确定为一个蛋白质像组件。
上图对比规范化PARAFAC集中载荷三个组件。这样做是为了每天的原料和成品水样本。可以看到,组件2一直在原水更加突出;在完成了水,最突出的组件是组件1。
组件的相对浓度3之间基本上是相同的治疗,同时改进删除组件2符合预期的影响混凝去除有机物分子量更高更有效地比低权重的物种。
可以看到,模式与更广泛的一个明显的相关性,红移光谱带甚麽的原水相比早先所示的成品水的形象。
葡萄酒分析
常见的红酒含有大量的颜色和荧光组件。这些主要是多酚在性质和中央几个质量参数的确定喜欢的风味和颜色。
荧光和紫外可见光谱检测并解决这些组件提供了潜力,也就是说,这些特征可以有效地揭示独特的红酒的成分性质。
吸光度、传输和荧光EEM数据可以为了评估lot-to-lot相结合,区域和品种特征。这种组合也可以用来感觉衰老的影响以及氧化和亚硫酸盐治疗。
上图显示了额,同时记录(A)和(B),吸光度和百分比透射光谱(C)和(D)为一个典型的意大利从刚开了瓶红酒。它同时也突显出(A)和(C)之前和之后为期一周的接触空气(B和D)。
的Aqualog®EEM和吸光度测量条件包括励磁/吸光度范围扩展了从200年到800年3 nm增量。还包括一个发射范围250到800纳米的CCD本增量4.65 0.1中获得和第二积分时间。
这些复杂的额突出的主要轮廓紫外线excitation-emission范围与主要的激发/发射峰发生在275/309 nm。
样本之前和之后都表明,吸光度和透射光谱表现出一个主要的灭绝峰值在275纳米左右,一个小肩峰约320海里,第二,小峰在520纳米左右。
这个275海里的峰值至少部分与酚类化合物在520 nm峰地区常与花青素的化合物。相比之前(C)和(D)样本后,这些显示增加灭绝整个光谱吸光度。这通常是氧化的现象。
额光谱轮廓非常复杂,这些都是由多个重叠的激发和发射组件。它们的复杂性会严重限制主要轮廓元素的定量和定性目视判读。
由于这个原因,多变量分析通常是为了分解EEM组件应用在质量和数量的上下文。
本研究评估了PARAFAC模型,在这种情况下,所有分数这是约束非负收益率值和加载参数。下表强调了五个谱加载组件,解决PARAFAC模型中使用的所有复制新鲜和氧化样品开发的葡萄酒。额外的初步鉴定,这些组件与现有文献相比。
下图显示了一个比较氧化的影响每个PARAFAC组件的样品酒。1是最著名的组件,组件前后氧化,与深紫外发光组件(1、2和3)增加比较多时间越长波长发射组件(4和5)。
胰岛素结构与分析
作为蛋白质激素,胰岛素由胰腺产生和基本代谢过程至关重要。商业胰岛素疗法通常会分为两个主要类别,这些被快速行动和长期代理胰岛素。
短期和长期代理胰岛素都非常相似,它们之间的区别是小一至三个残基的蛋白质序列。这些微小的序列变化与控制pH值的存储和交付用于触发或防止血液中胰岛素五个一二聚体形成。
随着这些聚合形成他们允许人体吸收胰岛素更慢。相比之下,没有这些聚集导致人体吸收胰岛素更快。蛋白质的稳定性和结构的变化类似胰岛素的药物动力学的核心通常是用荧光发射光谱、紫外可见吸收光谱、甚至偶尔,使用固有荧光氨基酸。
商业胰岛素结构高度集中(4毫克毫升−1的),这意味着款项校正对A-TEEM的精确测量是至关重要的™指纹。这是下图所示。
在这里,三个不同的胰岛素蛋白在不同浓度进行了分析。这些都是4.5到8.5的pH值和温度5°C到37°C。胰岛素的类型是:
- 重组人胰岛素[10]
- Insulin-aspart(商用、快速行动)
- 长效胰岛素(商用)
使用PARAFAC分析测量固有荧光A-TEEMs™允许聚合状态的描述每种类型的胰岛素。四个组件被确定在商业形态:-
- 组件1、2和3 (Comp1文件,Comp2和Comp3)确认为酪氨酸[11]
- 组件4 (Comp4)确认为间甲酚[12]——胰岛素制剂的防腐剂
上图中红色的数据点说明分数从四个组件PARAFAC模型适合重组人类胰岛素的解决方案在pH值4.5(前五个数据点),pH值7.4(第二个五个数据点)和pH值8.5(过去5数据点)。
每个重复在温度5°C, 20°C, 25°C, 30°C, 37°C的顺序。地特胰岛素的模型都是重复和策划(绿色数据)和胰岛素相同的顺序条件下数据(蓝色)之一。
例子所示,胰岛素——这通常是测序产生聚集在生物pH值和温度-展示一个更大的得分为组件1(明星)。这可能归因于酪氨酸的光谱蓝移胰岛素是一个聚合形式。
相比之下,人类胰岛素和胰岛素作为项目的解决方案(不太可能聚集在相同条件下)演示了很低的分数相同的组件。
考虑到结果,很明显,胰岛素序列,不同的只是1到3氨基酸可以使用固有荧光A-TEEMs分化™。
因为商业胰岛素结构有很高的浓度和吸光度值,A-TEEM™方法是一个理想的解决方案的描述商业蛋白质治疗配方,特别是在更传统的荧光方法可能无法达到预期的结果。
需要注意的是,这项研究并没有提供新的信息关于胰岛素或者这些特定蛋白质做或不做总根据制定情况。然而,它提供清晰洞察A-TEEM如何™方法可以用于蛋白质治疗形成聚合行为的特征,即使在情况只有微乎其微的蛋白质序列的差异。
似乎已经被证明是一个高度相关的方法在生物学领域。此外,A-TEEM™指纹识别技术理论上可以用于其他蛋白质疗法如疫苗、抑制剂、酶和抗体。
结论
荧光已经高度认为是一个非常敏感的工具,大量的样本类型的特征。然而,当结合其他测量技术,荧光的潜力变得更大。
的A-TEEM™方法在专利Aqualog实现®是唯一的同类仪器能够执行实时同步内部过滤器校正荧光光谱提供真实,NIST-traceable分子指纹。
这种级别的精度和质量是至关重要的,需要绝对的和可再生的分子指纹库,必须依赖可靠的定量分析的多种多样的选择的基本物质。
这篇文章探讨了,A-TEEM™方法——Aqualog结合使用®荧光谱仪——被用来监控水处理原料,其用户提供快速、准确和易于使用的工具。
这个应用程序已经扩展到其他领域如酒的研究中,在技术提供了机会来形容葡萄酒的主要化合物以及氧化的程度。
这种多通道方法有巨大的范围中使用的各种领域。它有潜在的实际应用在食品工业、生物医学领域和石化行业。此外,A-TEEM™已被证明是一个非常强大的方法的歧视存在的不同类型的胰岛素。
这些信息已经采购,审核并改编自HORIBA科学提供的材料。欧洲杯足球竞彩
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