外泌体、微囊泡和脂质体表面电荷和大小的测量方法简介

囊泡、胶束和微乳液在动态光散射的出现期间引起了相当大的关注。1这发生在20世纪70年代,在纳米技术和第一次生物技术革命之前。

然而,直到20世纪90年代,DLS仪器才变得足够小、足够强大、足够自动化,成为这些提出的靶向药物输送系统的常规应用。

脂质体是天然囊泡的合成版本,如外泌体、微囊泡、外泌体、前列腺体和其他几种具有生物发生特征的囊泡。2脂质体在20世纪80年代和90年代是一个热门话题,当时人们认为它们可能是靶向药物输送的主要候选对象。

然而,由于它们不是人体的自然器官,人们发现它们被白细胞攻击并被切开,导致它们相对高剂量的内部药物溢出到血液系统,通常是在远离目标器官(例如癌症器官)的地方。

尽管表面部分的加入带来了一些进展,它欺骗了白细胞,但尚不清楚这是否真的能成为靶向药物输送的重要竞争者。

微泡、脂质体和外泌体是核壳粒子。欧洲杯猜球平台核心是含有药物(脂质体)或细胞质蛋白、小rna、细胞特异性受体和表面标记物(外泌体和微泡)的水。外壳是一层脂质层。脂质体是人造的,缺乏欺骗白细胞的天然标记,因此受到了攻击。

表1。属性和起源

的名字 属性 起源
外来体 均质,直径40-100 nm,外泌体表面标记CD9、CD63、Alix、flotillin-1等。 当多泡体与质膜融合时从细胞中释放
微囊泡 非均质,直径50-1,000 nm。没有独特的标记 直接从质膜分裂
脂质体 均质,直径50-250 nm。有些有表面化学,许多没有 综合。体液中没有天然防御

粒子大小

最初由胎牛血清生成的样品被制备并在pH 7.4的PBS中稀释。使用50ul一次性BI-SM50电池,并将其放置到Brookhaven 90Plus中。温度设定在25°C,并保持平衡数分钟。在90°散射角下进行了三次3分钟的试验,所有试验都得到了相似的结果,误差在几个百分点以内。

有效直径131.5 nm, PDI(多分散性指数)0.208。大于100 nm的尺寸强烈表明多分散性,而小于0.025的PDI表示较窄的尺寸分布。计算了强度、体积和数量加权的尺寸分布。从图中可以看出,结果显示出了一种双峰型的尺寸分布,其中一种模式在80nm左右,而另一种模式在240nm左右,尺寸分布是双峰型的三倍,而不是宽的单峰型分布。

人们普遍认为,相对较少的大颗粒数量将主导强度加权粒径分布,同时也将有效直径移得更高。欧洲杯猜球平台

然而,当将分布重铸为体积加权时,较小颗粒的贡献百分比增加。欧洲杯猜球平台事实上,与电子显微镜等计数仪器相比,当进一欧洲杯猜球平台步重铸分布时,更小的粒子很容易占据主导地位。在本例中,舍入至最接近0.5%后,大颗粒显然没有显著贡献,而其余80nm颗粒出现在预期的外泌体尺寸范围内。欧洲杯猜球平台

分级汇总

由于微囊泡和外泌体是在细胞之间转移遗传物质的额外手段,它们是进一步靶向药物传递的尝试,以及致病蛋白质和rna转移的研究的竞争者。快速检查它们的大小和聚集状态的能力和重复使用DLS有助于表征它们的性质。本应用笔记解释了该容量。

电动电势

液体中粒子表面的电荷构成了粒子周围电荷密度的分布。这就引起了静电电位差,其中之一称为ζ电位差。如果ζ势太接近于零,粒子之间就没有静电斥力,因此总是存在的,自然发生的引力将导致粒子聚集。欧洲杯猜球平台这造成不稳定。为了保持稳定,静电稳定的粒子应该具有有限的zeta电位,通常大于20到30毫伏(mV)。欧洲杯猜球平台

然而,由于zeta电位也依赖于自由盐离子浓度的事实,zeta电位可以在高盐浓度的环境中降低,同时保留足够的斥力来分离粒子。欧洲杯猜球平台Zeta电位是由电泳迁移率的测定计算出来的:电极间液体中的带电粒子随着电场的应用而移动。欧洲杯猜球平台

在高盐环境中测量这种运动是非常复杂的,主要是因为电流经常太高,c加热和化学变化。因此,用生理盐水或PBS进行测量特别复杂。布鲁克海文ZetaPALS应用低电流在高盐和利用相位分析光散射来量化非常小的运动带电粒子具有极大的灵敏度。欧洲杯猜球平台因此,它特别适合于这种复杂的测量。

样品制备方法与上述粒度测定方法相同。电极被放置在一个约1250µL悬浮的方形塑料电池中。温度设定在25℃,样品平衡5分钟。

测得的平均电导率为27000µS。相比之下,传统的定量是在1 - 10毫摩尔的1:1电解质中进行的。这些浓度的电导范围为320 ~ 3200µS。电流过大持续时间过长会导致样品发生不可修复的变化和/或加热液体,这两种情况都会有效地破坏电泳运动的测量。

因此,测量在1,5,10,20,30,30,30和另外30个周期,周期对应1秒的电场在一个方向上,另一秒它是相反的,从而防止电极极化。初始126个循环的循环加权平均值为-17.7 mV,而最后30个循环的循环加权平均值为-3.36 mV。这说明样品由于过电流而发生了不可逆的变化。

电动电势总结

高盐的定量,如生理盐水或PBS是非常复杂的。布鲁克海文ZetaPALS自20世纪90年代以来一直通过使用相位分析光散射来实现这一目标。在本文中,从一个外来体在PBS中显示的zeta电位为-17.7mV,这可能不足以满足总的稳定性,这从被量化的聚集体的大小以及单体的大小可以看出。

参考资料及进一步阅读

  1. Degiorgio V., Corti, M., Giglio, M.,编辑,“光在液体和高分子溶液中的散射”,1979年,全会出版社,纽约。参见第二节,关于胶束的第111页,关于囊泡的第125页,关于微乳液的第139页。
  2. 李,Y., l. Andaloussi, S., Wood, M.J.A., Human Molecular Genetics, 2012, Vol. 21, Rev. Issue 1, R125- R134。

这些信息来源于布鲁克海文仪器公司提供的资料。欧洲杯足球竞彩

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    布鲁克海文国家实验室仪器公司。(2021年5月25日)。外泌体、微囊泡和脂质体表面电荷和大小的测量方法简介。AZoM。于2021年7月3日从//www.wireless-io.com/article.aspx?ArticleID=18148检索。

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    布鲁克海文国家实验室仪器公司。“外泌体、微囊泡和脂质体表面电荷和大小的测量方法简介”。AZoM。//www.wireless-io.com/article.aspx?ArticleID=18148。(2021年7月3日生效)。

  • 哈佛大学

    布鲁克海文仪器公司,2021年。外泌体、微囊泡和脂质体表面电荷和大小的测量方法简介.viewed september 21, //www.wireless-io.com/article.aspx?ArticleID=18148。

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