OD规格是对在某一波长被阻挡的光量的评估。
是透光率的对数，或:
OD = 2−log (%T)
OD值添加剂(如图1)。8阻塞405海里的OD值可以通过使用一个双色过滤器的OD 2.5阻塞在405 nm的发射滤波器的OD 5到6阻塞在405 nm如下图1所示。
注意，OD值约为6或更多是非常复杂的测量，在传统的光谱仪。实际阻塞可能比计算值高得多，如下面的右面板所示。
图1所示。透射(左)和外径(右)显示发射和二色滤光片。这些测量值由一个对数变换联系起来。当%T值很低时，OD值就会很高。OD是一种可加性(右边绿色曲线)。右边的面板显示了发射过滤器的模型性能，说明可能存在更高的OD，特别是在较低的波长。
本文将举例说明如何在常规的流式细胞仪系统中确定必要的阻断水平。
流血细胞计数器用于识别1 - 15 μ m范围内的细胞和颗粒。欧洲杯猜球平台通常使用激光散射和荧光来达到这一目的。样品以单个文件的形式通过检测系统，如图2所示。
图2。流式细胞仪中聚焦激光束(淡紫色椭圆形)与样品相互作用的图示。灰色细胞通过激光聚焦向下移动。
一种常用的流式细胞术激光是405 nm激光。它具有1米/秒的线性流速(在细胞计数系统中经常看到)，这意味着细胞或粒子中的任何一点都将接触到被照亮的体积(如上所示的淡紫色部分)约10毫秒。
使用100兆瓦的功率，利用下面的方程很容易确定样品中与荧光团相互作用的光子的数量。
其中时间(t)以秒为单位，功率(P)以瓦为单位，波长(λ)以米为单位。普朗克常数(h)为6.626x10-34年Js，光速(c)为3 × 108 m/s。
本文假设在整个分析过程中，所有的光子都与荧光团接触。公司的成立光子密度在样品的焦体积方面将是一种更彻底的方法。
有~ 2 * 1011光子在光束焦点中经过10µs的渡越时间。一些光碎片会穿过样品，一些会被弹性散射(Mie和Rayleigh散射离开细胞器)，一些会被非弹性散射(Raman散射)，一些会被吸收。
吸收光的错位可能是光化学或热的结果，也可能表现为荧光，荧光通常与激光束和样品粒子的运动方向成直角。欧洲杯猜球平台对于这个例子，它可以在纸的平面内或平面外。
最复杂的情况是试图阻挡激光束，同时识别单个荧光光子。
对于本场景，检测荧光信号并阻断2*1011405纳米的光子需要同时进行。第一个建议是，排放过滤器需要OD 11阻塞。
但事实并非总是如此。由于OD值是可加性的，如前所述，如果二色和发射滤波器的OD值相加为11，就可以达到充分的阻隔，但需要考虑的元素更多。
在实践中，由于散射光的数量通常比原始激光束的数量要小，所以可以使用更少的阻挡量。例如，如果散射1%的光来识别该散射信号中的一个荧光光子，则屏蔽要求为OD9。
在大多数情况下，描述单个光子的识别很可能是不切实际的。当荧光探针使用10纳秒的标准荧光寿命时，单个荧光团可以在10µs的传输时间内吸收(或被激发)1000倍的光。
荧光团的量子产量(Φ)描述了系统能够识别并重新发射为荧光光子的吸收光子的数量。色氨酸的含量范围为0.2,FITC的含量范围为0.9(是最高的含量之一)。
使用中间值0.5的单个荧光团将产生500光子，转化为OD7的阻挡要求。很可能每个细胞、蛋白质或粒子都有一定数量的荧光团附着。这意味着发射的光子数量将会更高，从而进一步降低了阻挡的要求。
如果系统中不同的光没有得到很好的控制，则阻塞OD值应该更大。例如，如果外壳不耐光，光学系统中就会出现不受控制的反射。Anti-reflection涂料可以解决这个问题，以及使用挡板和吸收材料。欧洲杯足球竞彩
外径经常过高，这增加了涂料的复杂性和成本。如果花时间来考虑系统中所有的光子，成本就会降低，信号也会得到优化。
*一种更详细的方法是计算样品焦体积内的光子密度。
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