蛋白质表征,鉴定和纯化指南

蛋白质表征可以是覆盖广泛的分析方法和技术的广泛研究领域。虽然生物化学案在蛋白质分析中取得了显着进展,但鉴定和纯化新蛋白质的过程仍然是一个强大的任务。这主要是由于缺乏具有发散聚集状态,尺寸,收费和结构的大分子的通用解决方案。

图像信用:jordi实验室

纯粹的大小和复杂性蛋白质表征源于几乎无穷无尽的蛋白质表达途径。所有蛋白质均由相同21个氨基酸残基的链条组装在近无限布置中。然后可以将它们折叠成大小不同的三维(3D)结构。蛋白质表征过程进一步复杂于它们永远不会被分离出现:单个细胞可能含有多达10,000种不同的蛋白质。

生物化学师如何开始表现良好,准确的蛋白质分析和表征?

纯化蛋白质

为了适当地表征单个蛋白质,化学家必须首先通过纯化方法将其与样品分离并通过任何数量的限定特性识别。如前所述,为了进行蛋白质表征生物化学家利用各种分析方法,从常规到实验。

The acquisition of proteins for analysis commences when a sample is selected and fractionated.例如,可以裂解细胞,并且可以通过差分离心提取所需的样品材料。越来越纯净的上清液与较大的样品碎片分离。即使在离心机中几次通过后,上清液也可能包含成千上万的不同蛋白质。

通过基于本征化学,电气或物理性质对样品进行分离技术进行利益蛋白质的纯化。色谱法(亲和力,凝胶过滤,离子交换,HPLC等)允许基于各种特征性的样品材料的高度选择性分离,使其成为蛋白质纯化的最常用技术之一。jordi Labs有助于公司了解蛋白质分子的结构。

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识别蛋白质

一旦最终确定了高纯蛋白质,就可以开始生物化学术,开始分子量,结构,组成和纯度/杂质的表征。这些目标通常是互连的,并且在特定顺序执行时最好地实现特定值的识别。例如,基于氨基酸组合物预期蛋白质链的分子量,其通过化学方法测定。

为了确定蛋白质的精确氨基酸序列,其肽主链通过许多潜在的方法裂解,例如胰蛋白酶消化,其中残留物从蛋白质链依次裂解并通过高压液相色谱(HPLC)和质谱。这是化学鉴定单个蛋白质序列的最常见方法。

这只是蛋白质如何鉴定的一个明显的例子以及相对于其化学结构发现的内容。其他例子包括:

  • 聚合状态
  • 消光系数(摩尔吸收率)
  • 同性恋和异质性
  • 分子量
  • 蛋白质修饰(糖基化,聚乙二醇化等)
  • 纯度/杂质
  • 光谱特性

Jordi Labs提供最高蛋白质表征和利用套件熟练的工具进行分析。如果您有新的蛋白质分析需求,并认为您可能会受益于jordi的支持,请立即联系团队的成员。

此信息已采购,从Jordi Labs提供的材料进行审核和调整。欧洲杯足球竞彩

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