基于发光的基因报告系统具有极高的灵敏度,被广泛应用于细菌、植物和小动物体内基因表达的研究。利用荧光素酶的系统能够促进复杂生物系统中转录的微小变化的准确量化。
与荧光中发现的信号相比,这些信号非常微弱。然而,背景本身就很低。虽然自体荧光易于干扰和掩盖信号信息,但当使用荧光时不会发生这种情况。
还避免了通常由照明引起的正常细胞过程的扰动。发光提供了比传统方法更详细地揭示转录调控的能力。
iKon-M深冷CCD相机是一种常用的发光成像工具。示例设置可能使用温度控制光密封室的工厂成像,高通量板格式或微流体系统。
iKon-M深冷CCD相机广泛应用于发光成像。在这个例子中,在一个温控光密封室中进行植物成像。许多使用高通量平板格式或微流体系统的其他设置也在使用中。图片来源:安铎科技有限公司
生物发光研究提供了一系列的好处,但也带来了一系列的检测挑战。这些检测挑战不同于典型荧光显微镜成像的常见挑战。下面概述了其中一些挑战。
灵敏度
发光反应仅产生有限数量的光子。因此,它是必要的,使用中的检测器提供最大灵敏度,以便随着时间的推移捕获发射的光子。这将允许检测器生成有用的信号。
超低噪音
信号将弱,因此重要的是,背景噪声保持在尽可能低的水平。曝光10分钟或更长,确保测量是“暗电流”有限的。
因此,探测器必须提供尽可能低的暗电流-尽量减少任何可能积聚在相机传感器内的自产生的热噪声。
定量的准确性
启动子分析、表达或细胞信号通路的变化有可能表现出微妙而重要的差异。一个好的探测器应该能够区分这些差异,以便更好地阐明实验数据。
动态范围
在同一图像中捕获低电平和高级信息需要宽动态范围的可用性。
技术解决方案
深冷CCD相机为发光实验提供了理想的解决方案,CCD相机提供的暗电流比快速sCMOS相机低1000->倍。对于长时间曝光(通常长达数分钟)来说,对CCD进行深度冷却以消除暗电流是必不可少的。
CCD相机包括具有高量子效率的传感器选项,为一系列发光报告系统提供了足够广泛的响应。特定的模型还提供了广泛的动态范围和定量测量所需的高线性度。
的iKon-M深冷CCD相机由于最低可能的暗电流和低读取噪声的组合,提供最低的背景噪声。由于仪器的超低背景结合了高量子效率(QE),确保了高灵敏度。
iKon-M CCD的表现变得特别明显,当工作较长曝光。
iKon-M深冷CCD相机提供了最低的背景噪声,由于低读噪声和最低可能的暗电流的组合。这种超低本底与>90%的高定量相结合,可获得最佳的灵敏度。iKon-M CCD的性能在长曝光时尤其明显。图片来源:安铎科技有限公司
iKon系列:用于植物发光成像的Andor相机解决方案
最具挑战性的发光实验由安多尔的iKon CCD相机系列——目前最灵敏的CCD相机——简单完成。
独家Ultravac™永久性真空技术和稳定,高效的热电冷却至-100°C是相机的核心,可为相机的行业领先的性能。
iKon CCD相机可以将暗电流驱动到可能的最低水平,QE高达95%,确保最高灵敏度。一个c安装配件允许iKon-M CCD模型耦合到显微镜或镜头时,作为自定义光学设置的一部分。
iKon-M的发光要求和好处
iKon-M CCD相机提供了一系列的好处,当使用发光实验。
荧光素酶活性的微弱光子发射信号检测
由于大多数荧光素酶的发射波长范围的辐射波长范围,IKON-M CCD相机可以捕获每个Photon。
13µm像素尺寸确保了光子收集和高分辨率的平衡,1024x1024传感器格式确保与行业标准c-mount镜头格式的兼容性。这导致了增强的光子探测和加速的实验吞吐量。
延长时间测量与分钟的曝光
业界领先的冷却低至-100°C,使iKon-M提供最低可能的暗电流。
即使是20-30分钟的长时间曝光,也可以达到最佳的信噪比和最低的噪声下限。在尽可能低的背景下保证了信号的有效分离。
记录准确的生理
优异的敏感性与特殊的定量精度相结合,这意味着可以在转录水平处发现微妙的效果,例如,由于昼夜节律而导致的变化。这允许用户对其数据保持最大的信心。
量化弱和高水平信号在一个单一的图像
高电平信号和低电平信息可以同时量化,为实验设计提供了切实的好处,并允许在单个实验中广泛的信号水平
因此,用户能够在一个图像中获取准确的生理数据。
质量和寿命
iKon-L提供了一个5年的保证UltraVac™真空传感器外壳.永久性真空工艺经过很好的证明,这对于冷却和保护反向照射传感器免受冷凝物和水分来说至关重要。这些因素结合起来以确保持续高性能。
单细胞生物发光成像
当从典型的发光实验转向单细胞水平的研究时,甚至可能需要更高的灵敏度。iXon EMCCD系列是这些研究的理想选择。
参考
-
王飞,高永顺,刘亚文,张鑫,顾兴兴,马定邦,赵志伟,袁镇江,薛宏伟,刘洪涛。BES1监管BEE1控制光周期开花蓝光的下游信号通路在拟南芥中。2019年新植物学家.
-
yeon jeong金,大卫e somers。基于荧光素酶的基于荧光素酶的翻译后控制因子屏幕调节伪响应调节器PRR7。植物科学的边疆。欧洲杯线上买球2019年第10卷。https://www.frontiersin.org/article/10.3389/fpls.2019.00667.DOI = 10.3389 / fpls.2019.00667
-
Kui Han,Long Mei,Ruoyu Zhong,Yuhong Pang,Eric Erquan Zhang and Yanyi Huang(2020)对单细胞水平哺乳动物昼夜昼夜间昼夜钟间耦合系统进行实验模拟的微流体方法。Lab Chip,2020,20,1204-1211https://doi.org/10.1039/D0LC00140F
-
战斗,兆瓦和琼斯,马。 Cryptochromes integrate green light signals into the circadian system. Plant Cell Environ. 2020; 43: 16– 27. https://doi.org/10.1111/pce.13643
这些信息都是从Andor Technology Ltd提供的材料中获取、审查和改编的。欧洲杯足球竞彩
有关此来源的更多信息,请访问和或科技有限公司