QSight™LC-MS/MS牛奶中抗生素分析方法

磺胺类药物通常被称为“磺胺药物”——磺胺的衍生物(对氨基苯磺酰胺)。由于其抗菌性能好、成本低、毒性低，常被用作兽医治疗常见细菌性疾病的抗菌药物。²

不受控制的兽药使用和不遵守停药期可能导致药物在治疗后残留在动物组织中。这些残留物可能会通过动物的奶传递给人类。^3、4

通常的做法是对奶牛使用不同的抗生素进行不同的处理，但这最终会导致抗生素残留在牛奶中积累，当人类食用时可能会引起过敏反应和毒性作用。

这些治疗还可以促进细菌耐药菌株的发展。^5，6

欧盟的监管机构已经发布了一系列官方文件，旨在更好地监管兽药的控制，以保护消费者。理事会指令96/23/EC7概述了对食品生产动物的兽药残留的控制。

在印度，FSSAI(2018年7月20日的公报通知)和EIC(水产养殖、鸡蛋、蜂蜜、牛奶家禽等的RMP)要求早期和频繁分析抗生素。EIC和FSSAI建立了动物食物基质中常见的一系列特定抗生素残留的最大残留限量(MRLs)。

为了维护消费者的安全并防止他们接触兽药，对牛奶进行磺胺残留检测至关重要。本文概述快速、灵敏质/ MS方法用于牛奶中磺胺类抗生素的定量分析。

实验

硬件和软件

一个PerkinElmerLX-50 UHPLC系统用于色谱分离，同时通过配备ESI和APCI电离源的PerkinElmer QSight™220三重四极质谱仪进行检测。

仪器控制、数据采集和数据处理均使用Simplicity 3Q™软件在一个窗口内完成。表1提供了LC参数，包括柱和流动相梯度程序。

表1。UHPLC参数。资料来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

LC列	Univ C18AQ 100 mm X 3 mm X 2.1μm (P / N N9304784)
流动相一	0.1%甲酸水溶液
流动相乙	0.1%甲酸乙腈
流动相梯度	老不。 时间 %的 % B 1 0．00 98 2 2 １．５０ 98 2 3. 6．00 4 96 4 6．50 4 96 5 7．00 98 2 6 7.50 98 2
柱温箱温度	40ºC
自动取样器温度	15ºC
注入量	10μL
流	0.5毫升/分钟
运行时	7.5分钟
ESI电压(+ Ve)	5300
干燥气体	110
喷雾器气体	300
源温度	300
HSID温度	220

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试剂和化学物质

所有CRM、试剂和化学品均为NIST可溯源和LC-MS/MS级。这项研究还利用了1型水。

方法

储备溶液和校准标准准备

将所有分析物的10 mL标准混合物配制成10 mg/L的备用溶液。这是通过适当的体积从母液到10毫升容量瓶，然后用适当的溶剂为每种抗生素分析物。

标准溶液均保存在-20ºC。用乙腈水(80:20,v/v)连续稀释备用溶液的工作溶液(5、10、25、50、100和200 ng/ml)，制备校准标准品。

样品提取过程

• 取2 g±0.1 g样品称量至50 mL PTFE离心管中。
• 总共加入了4毫升水，然后在涡流中摇晃30秒，然后静置30分钟。
• 加入10 mL乙酸乙酯，然后在涡流中振荡2-3分钟，以确保溶剂和分析物的适当相互作用。
• 样品以10000 rpm离心10分钟。
• 将5 mL上清加入蒸发管，在40ºC的氮气蒸发器下蒸发至干燥。
• 用1 mL乙腈:水(80:20,v/v)重建样品并漩涡。
• 然后用0.2µm滤纸过滤样品。

结果和讨论

通过6个校准点对5 - 200 μ g/L μ g/L浓度进行线性分析。该方法与R具有良好的线性关系²>0.99为所有研究的乳基质中的抗生素。所有抗生素的定量限(LOQ)为10µg/L。

表1为LC法和MS源参数，表3为所研究抗生素的TMRM模式转变。

表2。基体效应。资料来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

被分析物	溶剂性病。	Matrix-matched区域。	我%
Sulfamethoxypyridine	50655	80960	60
磺胺噻唑	38731.8	43709	13
Sulfadiazin	10873.6	43955.7	304
磺胺嘧啶	18719.4	56815	204
Sulfamethizole	76718.8	122715	60
Sulfachloropyridazine	72406.6	111414.3	54
Sulfaisoxazole	94119.2	154994.2	65
Sulfaquinoxazole	30548.2	37611.5	23
磺胺喹喔啉	29353	37376	27

表3。分析物的MRM转换和保留时间。资料来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

被分析物	前体	产品1	公元1	产品2	公元2	RT
Sulfamethoxypyridine	281	156	-23年	65	-78年	3.68
磺胺噻唑	256	156	－20	65	-73年	6.07
Sulfadiazin	251	156	-22年	108	-34年	3.08
磺胺嘧啶	250	156	-22年	184	-23年	3.24
Sulfamethizole	271	156	-19年	92	-41年	3．50
Sulfachloropyridazine	285	156	－20	108	-38年	3.76
Sulfaisoxazole	268	156	-19年	113	－20	3.95
Sulfaquinoxazole	301	156	-23年	92	-48年	4.15
磺胺喹喔啉	301	156	-23年	208	-25年	2．15

基体效应

将基质匹配标准品(萃取前峰面积)的响应与相应的标准品在溶剂中的峰面积进行比较。这是在六个重复中完成的。

这一过程使得基质效应(ME)能够被量化为使用基质标准面积和溶剂标准面积在峰区抑制或增强的平均百分比(表2)。负的ME值表示基质诱导的信号抑制，而正的值表示信号增强。

恢复研究

所有化合物的回收率通过在6个重复的牛奶样品中添加10、25和50µg/kg水平来确定。

所有分析物的回收率发现在80%到120%之间，而所有化合物的RSD百分比低于20%——符合法规要求的可接受值。

表4、5和6表示带有回收率和RSD的三级回收率。在完成最终稀释因子的计算后，对6个重复的数据进行分析。

表4。加样回收率为10 μg/kg，稀释倍数为实际加样的5倍。资料来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

被分析物	Rec 1	Rec 2	Rec 3	Rec 4	Rec 5	Rec 6	Avg	方差	%相对标准偏差	%的复苏
Sulfamethoxypyridine	10.73	10.61	10.61	10.00	10.60	10.89	10.57	0.30	2.88	105.72
磺胺噻唑	10.60	9.39	8.98	7.92	6.88	7.73	8.58	1.34	15.58	85.83
Sulfadiazin	9.51	8.84	9.38	10.97	10.10	9.16	9.66	0.76	7.92	96.60
磺胺嘧啶	10.05	8.33	9.54	10.55	8.86	9.56	9.48	0．80	8.42	94.81
Sulfamethizole	10.25	9.88	9.95	9.28	9.10	8.94	9.57	0.53	5.52	95.65
Sulfachloropyridazine	10.86	10.27	10.75	10.06	10.48	10.54	10.49	0.30	2.83	104.94
Sulfaisoxazole	10.29	10.39	10.08	9.81	9.81	9.93	10.05	0．25	2.45	100.53
Sulfaquinoxazole	10.42	10.31	10.39	9．27	9.19	9.92	9.92	0．56	5.64	99.16
磺胺喹喔啉	10.41	10.35	10.71	9.67	9.81	10.63	10.26	0．43	4.19	102.64

表5所示。加样量为25 μg/kg，稀释倍数为实际加样量的5倍。资料来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

被分析物	Rec 1	Rec 2	Rec 3	Rec 4	Rec 5	Rec 6	Avg	方差	%相对标准偏差	%的复苏
Sulfamethoxypyridine	26.00	26.84	26.07	19.43	18.88	19.35	22.76	3.89	17.11	91.04
磺胺噻唑	21.19	20.56	23.42	22.02	22.80	21.75	21.96	1.04	4．75	87.83
Sulfadiazin	24.78	24.87	23.56	22.85	21.04	21.84	23.16	１．５５	6.69	92.63
磺胺嘧啶	25.99	27.17	28.12	22.12	21.31	23.61	24.72	2.79	11.27	98.88
Sulfamethizole	24.29	24.83	24.69	17.75	17.86	17.47	21.15	3.79	17.92	84.60
Sulfachloropyridazine	26.18	26.12	26.49	19.90	19.55	19.31	22.93	3.67	15.99	91.70
Sulfaisoxazole	25.94	26.04	26.06	18.64	18.46	18.93	22.35	4.02	18.00	89.39
Sulfaquinoxazole	26.54	26.41	25.50	18.67	18.18	19.83	22.52	4.03	17.88	90.08
磺胺喹喔啉	24.80	25.24	25.31	18.85	18.99	17.89	21.85	3.61	16.51	87.38

表6所示。加样回收率为50 μg/kg，稀释倍数为实际加样的5倍。资料来源:PerkinElmer食品安全和质量公司

被分析物	Rec 1	Rec 2	Rec 3	Rec 4	Rec 5	Rec 6	Avg	方差	%相对标准偏差	%的复苏
Sulfamethoxypyridine	47.45	48.29	48.24	53.66	54.03	54.35	51.00	3.32	6．50	102.00
磺胺噻唑	55.00	58.66	57.69	46.03	42.92	44.31	50.77	7.12	14.03	101.54
Sulfadiazin	50.20	50.65	49.93	52.42	53.82	53.27	51.71	1.67	3.23	103.43
磺胺嘧啶	47.09	53.56	48.14	41.95	47.72	49.41	47.98	3．75	7.82	95.95
Sulfamethizole	48.12	49.35	48.48	56.60	56.17	56.57	52.55	4.29	8.17	105.10
Sulfachloropyridazine	48.23	49.33	47.41	55.44	54.52	54.99	51.65	3.71	7.18	103.31
Sulfaisoxazole	49.05	48.30	47.64	56.79	54.55	55.72	52.01	4．11	7.91	104.01
Sulfaquinoxazole	49.91	47.25	47.99	55.20	54.52	54.91	51.63	3.67	7.10	103.26
磺胺喹喔啉	48.85	48.02	48.46	54.06	54.54	56.22	51.69	3．64	7.04	103.38

结论

在整个研究中获得的结果突出了QSight™LC-MS/MS方法在牛奶中高效、常规抗生素分析的能力。结果表明，该方法具有良好的色谱重复性。通过限定符和定量符离子比对样品分析物进行鉴定和确认。

建立了一种快速、可靠的UHPLC-MS/MS同时测定牛奶基质中磺胺类药物的方法。定量限为10µg/kg，线性范围为5 ~ 200 mg/kg，回归系数为> 0.99。

用这种方法得到的loq完全低于规定的水平，表明PerkinElmerQSight™220 LC-MS/MS系统是一个灵敏、可靠的平台，非常适合于牛奶中磺胺类药物的分析。

参考文献

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7. 欧洲议会和欧洲联盟理事会成员(1996年)。1996年4月29日关于监测活的动物和动物产品中某些物质及其残留的理事会指令96/23/EC，并废除指令85/358/EEC和86/469/EEC和第89/187/EEC和第91/664/EEC。Oj l125, 10 - 32。

致谢

制作材料最初由Narayan欧洲杯足球竞彩 Kamble博士Kailas Gavhane博士和Umesh Talekar博士从PerkinElmer(印度)pv . Ltd.撰写。

这些信息来源于PerkinElmer食品安全和质量公司提供的材料。欧洲杯足球竞彩

有关此来源的更多信息，请访问PerkinElmer食品安全和质量。