AuroFlow™PR1ME™BT Combo MRL Assay是一种具有竞争力的条带检测方法。它被专门设计用于快速检测生混合牛奶中残留的β-内酰胺。它也适用于一系列代谢物的检测，包括青霉素，头孢菌素和四环素。
该测定检测欧洲MRL低于欧洲MRL的水平的17个β-内酰胺（包括特异性代谢物），以及3个四环素，在7分钟内提供这些结果。
原理的方法
为了评估这些测试的稳健性，将原料奶样品在2-15°C下混合，以确保样品均匀性。
一根空管子插入Auroblock™孵化器，用200μl乳加入管中。接下来是测试条，插入指向箭头的箭头。
表格1。乐器阅读：测试结果的解释。资料来源：PerkinElmer食品安全和质量
| 比(面积测量) |
解释 |
| ≤1.00 |
消极的 |
| <1.00 |
积极的 |
图1。AuroFlow™PR1ME™BT Combo MRL检测试纸的目视解释图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
将样品在50℃下在从管中取出测试条后在50℃下孵育7分钟。通过比较β-内酰胺，头孢菌菌和四环素线具有控制线强度的强度，目视解释结果。
还可以通过在QuickSTAR™条状测试阅读器中读取条状来评估结果，然后应用1.00的比值来表示截止值。如果某一抗生素检测线出现的强度低于对照线，则该样本可视为该抗生素阳性。
这AuroFlow™PR1ME™BT Combo MRL Assay测定15种β-内酰胺类和4种四环素类抗生素的预测检测能力(CCβ)。
在一系列浓度下用每种抗生素强化抗生素的牛奶样品。这些浓度在最高和低于最大残留物极限（MRL）。
每个样品使用10至20个测试条(从一个批次)每个浓度进行测试。
检测能力的特征在于测试的单次乳样品的最低分析物浓度，其测试阳性结果至少19个测试中的至少19个。
根据兽医筛查方法的指导来进行测试（社区参考实验室20/01/2010）。还测试了总共115种抗生素牛奶样品。
表2。用最大残留物限制（MRL）测试的抗生素和每个测试浓度。资料来源：PerkinElmer食品安全和质量
| 抗生素 |
欧盟推广(μg /公斤) |
测试浓度（μg/ kg） |
| 阿莫西林 |
4. |
1,2,3,4 |
| 氨苄青霉素 |
4. |
1,2,3,4 |
| 头孢逸 |
125. |
|
| 头孢洛宁 |
20. |
4,6,8,20 |
| Cefazolin. |
50. |
25 50 60 75 |
| cefoperazone. |
50. |
1,1.5,2,3 |
| cefquine. |
20. |
5 10 15 20 |
| Ceftiofur |
100. |
10,20,30,100 |
| cefalexin. |
60 |
100,500,1000,1500 |
| Cephapirin |
60 |
4,5,6,60 |
| 邻氯青霉素 |
30. |
2,3,4,30 |
| 双氯青霉素 |
30. |
1,2,3,30 |
| Nafcillin |
30. |
2 4 6 30 |
| 新青二 |
30. |
2,3,4,30 |
| Desfuroylceftiofur |
100. |
10,20,30,100 |
| 青霉素G. |
4. |
1,2,3,4 |
| Desacetylcephapirin |
60 |
10,15,20,60 |
| 四环素 |
100. |
5 10 20 100 |
| 氧四环素 |
100. |
10,20,30,100 |
| Chlortetracycline. |
100. |
10,20,30,100 |
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制备一系列100-250 mg/L的抗生素原液。这是使用USP级抗生素库存，这些是可用的- desfuroylceftiofur，和desacetylcephalin从多伦多研究化学。
在50:50（％v / v）甲醇/水中制备β-内酰胺储备溶液，而在100％甲醇（ACS级）中制备四环素。将溶液混合并超声处理直至完全溶解在各种情况下。
每个文本使用单个牛奶样品(第91017OP号批号)，以一次性等价物的方式在-80°C下存储。aliquot在使用前解冻，并加强与适当浓度的抗生素原液。
Qiagen ESE Reader Plus用于确定阳性和阴性样品，当抗生素对控制线比<1.00时，结果被认为是阳性的，并且当抗生素对控制线比≥1.00时被认为是负的结果。
结果
在研究中为每种抗生素产生剂量反应曲线。这在MRL或周围的各种浓度下产生，利用线强度来确定检测限（LOD）。
图2至21通过显示控制线与每种抗生素相应的线强度来突出响应。
图2。阿莫西林与对照剂量响应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图3。氨苄青霉素与控制的剂量反应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图4。头孢曲利与对照的剂量反应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图5。头孢氯铵与对照的剂量反应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图6。头孢唑林与对照的剂量反应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图7。CEFoperazone与控制的剂量反应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图8。Cefinome与控制的剂量响应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图9。头孢噻呋与对照的剂量反应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图10。头孢氨苄与对照的剂量反应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图11。头孢匹林与对照的剂量反应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图12。氯唑西林与对照的剂量反应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图13。双氯甲嘧啶与对照剂量响应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图14。Nafcillin与对照的剂量反应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图15。苯唑西林与对照的剂量反应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图16。Desfuroylceftiofur与控制的剂量响应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图17。青霉素G与对照的剂量反应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图18。Desacetylcephapirin与控制的剂量反应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图19所示。四环素与对照的剂量响应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图20。土霉素与对照的剂量反应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图21。氯化碳酸乙酯对照剂量响应曲线。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
将每种抗生素的LOD计算为最低可检测浓度，其有95％的几率阳性结果（表3）。测试另外115个负乳样品以确保再现性（表4）。
表3。AUROFLOW™PR1ME™BT组合的检测限能。资料来源：PerkinElmer食品安全和质量
| 抗生素 |
欧盟推广(μg /公斤) |
检出限(LOD) |
| 阿莫西林 |
4. |
3.5-4 |
| 氨苄青霉素 |
4. |
3. |
| 头孢逸 |
125. |
20. |
| 头孢洛宁 |
20. |
8. |
| Cefazolin. |
50. |
40 |
| cefoperazone. |
50. |
2 |
| cefquine. |
20. |
12-15 |
| Ceftiofur |
100. |
20. |
| cefalexin. |
60 |
1100 |
| Cephapirin |
60 |
5 - 6 |
| 邻氯青霉素 |
30. |
3. |
| 双氯青霉素 |
30. |
2 |
| Nafcillin |
30. |
5 - 6 |
| 新青二 |
30. |
3. |
| Desfuroylceftiofur |
100. |
30. |
| 青霉素G. |
4. |
2 |
| Desacetylcephapirin |
60 |
18-20 |
| 四环素 |
100. |
12-15 |
| 氧四环素 |
100. |
30. |
| Chlortetracycline. |
100. |
20-30 |
表4。在AUROFLOW™PR1ME™BT组合测试条上的每个相应线路上的平均线强度和测试115负牛奶样品的比例。资料来源：PerkinElmer食品安全和质量
| 行强度(mV) |
|
控制 |
Ceftiofur |
β-内酰胺 |
四环素 |
| 平均数 |
217.5 |
449.3. |
449.8 |
428.8 |
| SD. |
13.4 |
28.2. |
23.7 |
35.1. |
| ％ 简历 |
6.2 |
6.3 |
5．3 |
8.2 |
| 比 |
|
Ceftiofur |
β-内酰胺 |
四环素 |
| 平均数 |
449.3. |
449.8 |
428.8 |
| SD. |
28.2. |
23.7 |
35.1. |
| ％ 简历 |
6.3 |
5．3 |
8.2 |
结论
这AuroFlow™PR1ME™BT Combo MRL Assay能够在欧洲MRL水平下检测14β-内酰胺抗生素。它可以检测头孢噻呋和Cephaprin的代谢产物下面MRL水平，以及能够检测欧洲MRL下的所有3个受管制的四环素抗生素。
验证结果证实，AuroFlow™PR1ME™BT Combo MRL Assay是用户筛选生混合牛奶中β-内酰胺和四环素测试的理想解决方案。
致谢
由来自PerkinElmer欧洲杯足球竞彩, Inc.的Nicolas Kosa原创的材料制作。
此信息已采购，从PerkinElmer食品安全和质量提供的材料进行审核和调整。欧洲杯足球竞彩
有关此来源的更多信息，请访问PerkinElmer食品安全和质量。