近年来，在食品中添加未经授权的原料一直是消费者关注的主要问欧洲杯足球竞彩题。例如，在伊斯兰教，猪肉和/或猪肉制品的消费是严格禁止的。
因此，开发一种能够识别和量化猪肉和猪肉相关产品特异性生物标志物的方法是至关重要的。1，2
敏感和选择性LC / MS / MS技术已经开发了三种猪肉特异性肽作为生物标记物，用于肉类样品的快速识别和分析。
实验
样品制备
将重量为2克的肉制品或碎肉溶解在5ml的提取液中。1 - 4样品旋转，12000 rpm/min离心10分钟。
冷却至室温后，通过二硫代噻钛糖醇减少0.5ml上清液，用碘乙酰胺在黑暗的地方烷基化，用800μl25mmol/ L tris-HCl（pH8.0）稀释，并补充序列改性胰蛋白酶。
将样品在热振荡器中在37℃下在缓慢摇动过夜，以使全部消化能够。用20μL甲酸淬灭酶活性。
固相萃取柱用于脱盐和浓缩消化样品。为了减小体积，将含有多肽的SPE洗脱液干燥，然后通过0.22 μ m膜过滤器过滤，然后进行LC/MS/MS分析。
LC分离
一种PerkinElmer QSight®LX-50 UHPLC系统用于将分析物分解在C18柱上。
柱箱温度设为40℃。流动相为水(A)和乙腈(B)，均含0.1%甲酸。进样量为10 μL。洗脱梯度如表1所示，流速为0.4 mL/min。
表1。LC洗脱液梯度。资料来源：PerkinElmer食品安全和质量
| 时间(分钟) |
流量(毫升/分钟) |
(%) |
B（％） |
| 0. |
0．4 |
98 |
2 |
| 0．8 |
0．4 |
98 |
2 |
| 14. |
0．4 |
60. |
40 |
| 15. |
0．4 |
2 |
98 |
| 17.5 |
0．4 |
2 |
98 |
| 17.6 |
0．4 |
98 |
2 |
| 20. |
0．4 |
98 |
2 |
MS条件
QSight LX-50 UHPLC系统与QSight 220三四极质谱仪耦合，QSight 220配备电喷雾电离源，工作在正离子模式。
质谱仪操作条件如下：
-
喷雾器气体:180
-
干气：100
-
电喷雾电压：5000
-
HSID温度:320°C
-
加热气体温度:400°C
采用多反应监测模式(MRM)进行串联质谱检测。在一次注射中，我们使用了三个特定的肽段，每个肽段都有2个MRM转换来分析样品。数据处理和采集使用PerkinElmer Simplicity™3Q软件。
结果与讨论
基于它们在猪肉中独特的MRM过渡的三种选定肽的特异性在未加工的猪肉基质中测试，如图1所示，与鸡，羊肉，牛肉和鸭等其他肉类矩相比，如图2所示。
图1。由MRM模式获取的原料猪肉的典型色谱图：（a）总离子色谱图（b）提取离子色谱图。注意：1：Pork_peptide_1，RT 8.5分钟;2：Pork_peptide_2，RT 8.9分钟;3：pork_peptide_3，RT 12.7min。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
图2。通过MRM模式获得的其他肉类基质的典型色谱图:鸡，鸭，羊肉，牛肉。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
结果表明，这3种多肽可以作为猪肉和猪肉源产品的生物标志物，因为它们对猪肉具有独特性和特异性。通过检测它们在生猪肉和熟猪肉(煮熟)中的MRM反应，评估生物标志物肽的热稳定性。
每一种肽在烹煮前后的灵敏度均无明显变化，表明其热稳定性，如图3所示。
图3。来自LC-MRM分析的典型色谱图原料（上）和煮熟（底部）猪肉。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
对于三种肽中的每一个，在猪样品中具有良好的浓度范围（1至100％w / w），在猪肉样品中具有良好的线性响应，如图4所示，在众细的线性响应中产生校准曲线。
图4。猪肉基质中三种多肽的校准曲线(R2> 0.990)。图像信用：PerkinElmer食品安全和质量
该技术的定量限(LOQ)值为肉类混合物中1% (w/w)的添加猪肉。
结论
灵敏、快速、有选择性LC / MS / MS技术已经开发出对熟猪肉和生猪肉三种肽的分析。优化的样品制备程序可用于分析原料，煮熟和加工的肉类产品，易于遵循。
在各种食品中，该技术能够在1％w / w（10mg / g）的阈值检测限中选择性地检测来自猪肉物种的肽。因此，该技术可用于分析清真食品（或猪肉相关食品）样品。
参考文献
- 王志强，王志强，王志强，等。j·阿格利司。食品化学。2013,61,11986−11994。
- 等。j·阿格利司。食品化学。2014,62,9428−9435。
- 王志强，王志强，王志强，等。肛交。化学学报。2015,46(5):514 - 514。
- Yvonne G, Andrew D. W, Neil M. R等。j . Visu。专家，2016,115,e54420, 1-7。
这些信息来源于PerkinElmer食品安全和质量公司提供的材料。欧洲杯足球竞彩
有关此来源的更多信息，请访问PerkinElmer食品安全和质量。