高通量分析四环素在动物组织

四环素(tc)是最常使用的抗生素在动物生产部门,主要用来防止感染,治疗疾病和保护动物的生长。

还存在一种风险,即过度使用抗生素,如四环素可能导致食品残渣侵犯来自动物,例如,牛奶和肉。这些残留对人类健康和福祉构成风险。

四环素残留在食物可能导致毒性,以及一系列的副作用,包括过敏反应,也可能导致细菌耐药性,可以转移到人类。

全球监管机构建立了最大残留水平(MRLs),这是食品中兽药的公差,保护人类健康。欧盟、中国和加拿大将他们称为“最大残留的食品中药物残留水平。”与此同时,美国称这些“公差”。1、2

使用技术,敏感和高度选择性足以确保准确监控四环素根据监管要求是一个重要的工具在维护人类健康。本文演示UHPLC / MS / MS方法快速、灵敏和定量分析四环素的肉。

提高实验室效率,QS-Works高吞吐量autosampler是利用。仪器的温度控制的托盘,大容量和机器手臂帮助促进长时间无人操作。

QS-Works还允许实验室运行600样本序列,提高实验室检测的效率。

这里开发的方法证明了敏感性,复苏,精密线性和选择性的必要分析四环素在肉低公差水平设置的不同的世界各地的监管机构。

实验

硬件和软件

进行色谱分离一个PerkinElmer QSight®LX50 UHPLC系统。检测是实现利用PerkinElmer QSight®420 MS / MS探测器。

高容量QS-Works autosampler来增加实验室的工作效率。简单3 q™软件平台是用来促进仪器控制、数据采集和后续数据处理。

女士LC方法和来源的条件

表1显示了LC方法和女士源参数。表2显示了不同反应监测模式(MRM)四环素的转换。至少两个MRM转换为每个分析物被监控。这样做是为了减少假阳性和阴性结果的方法。

MS / MS参数的优化,包括保理产品变量如选择母离子和离子(CCL2),入口电压(EV)和碰撞能量(CE),通过注入标准完成。

源条件的优化是实现通过与LC t-infusion整洁的标准流。收购女士方法的基础上进行的优化条件。

表1。LC方法和女士源参数。来源:PerkinElmer食品安全和质量

LC和女士条件
流动相一 水(含有0.1%的草酸)
流动相乙 乙腈(包含0.1%甲酸)
列 PerkinElmer类星体SPP农药,100×4.6毫米;2.7μm (N9306880)毫米
柱温箱温度 20°C
Autosampler温度 20°C
注入量 5μL
ESI电压(正面) 5100 V
干燥气体 120年
喷雾器气体 250年
源温度 350°C
HSID温度 250°C

表2。MRM转换。来源:PerkinElmer食品安全和质量

复合名称 前体离子/ Da 产品离子/ Da CE / V 电动汽车/ V CCL2 / V
Oxytetracyline 461.3 426.3
201.2		 -21年
-49年		 31日
25		 -136年
-180年
四环素 445.3 410.3
427.3		 -22年
-15年		 29日
27		 -144年
-124年
金霉素 479.2 154.0
444.2		 -34年
-25年		 26
29日		 -136年
-164年
Doxytetracycline 445.3 154.1
154.0		 -35年
-34年		 29日
26		 -140年
-136年

标准和样品制备

每一个试剂、溶剂和稀释剂利用LC / MS品位。所有TC标准——这是在冰箱里储存在-20°C条件阻止他们的退化——得到Sigma-Aldrich®公司。

飙升的股市和药物混合解决方案和校准阶段准备在每个TC甲醇。为了防止退化的标准,所有的工作标准和股票都存储在冰箱条件直到他们准备使用。

均质样品,以下程序后:

  • 一个代表性的肉样品切成小段,然后混合。
  • 1 g整除的均质肉样品,连同一个8毫升的0.1 EDTA水溶液被放置在一个50毫升离心管和漩涡。
  • 17毫升的乙腈被放置在相同的管和漩涡。
  • 这管被放置在冰箱条件和维持在-20°C 30分钟。
  • 其次是使离心10分钟4000 rpm。
  • 然后将8毫升的上层清液转移到50毫升干净的离心管,5毫升的己烷添加示例脱脂。
  • 管涡3分钟。
  • 这之后,解决方案是然后在4000转离心1分钟。
  • 然后将3毫升的低阶段转移到一个新的15毫升离心管。
  • 这是蒸发干燥通过吹氮在它的温度50°C。
  • 干提取被溶解在重组1毫升的甲醇/水(30/70,v / v)解决方案,包含0.01草酸。
  • 前注入到LC / MS / MS系统,这些样本提取涡和过滤通过0.2µm聚四氟乙烯注射器过滤器。3

结果与讨论

本研究的目的是评估的性能高容量QS-Works autosampler验证样品制备方法来确定四环素在肉类样品的水平。

采用高吞吐量autosampler,如QS-Works,提高生产力和效率测试实验室。

在食品检测实验室拥有大量的样本分析,QS-Works允许快速处理样品,同时提高数据质量和一致性由于使用机械抽样单位(图1)。

QS-Works autosampler

图1所示。QS-Works autosampler。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

最大残留水平(MRLs)制定食品中四环素的健康加拿大或美国食品及药物管理局利用建立的公差作为参考目标水平,当X表3所示。检测阈值——“是/否”筛查水平应达到或者低于0.5 x。

4四环素的色谱图(XIC)具有良好的峰决议可以看到如图2所示。识别和确认是由监控两个离子转换。

XIC色谱)氧四环素,b)四环素、金霉素,d) doxytetracycline

图2。XIC色谱)氧四环素,b)四环素、金霉素,d) doxytetracycline。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

这使得高选择性和特异性的识别。离子比率计算,计算峰面积为不太强烈的离子峰面积更强烈的离子生成离子比率。

由于食物样本矩阵的多样性和复杂性,样品基体效应(MEs)是主要的LC / MS / MS方法发展的担忧。

应急服务国际公司是容易电离抑制charge-competing矩阵组件的分析物。它建立了matrix-induced增强效应发生在应急服务国际公司,这也可以引入量化很大的偏见。

为了克服样本MEs,几种方法已经被使用。包括样本稀释,使用稳定同位素的内部标准,matrix-matched (MM)校准标准,样品清理和使用效率高列提高分离。

通过比较获得的校准曲线的斜坡上的肉样本矩阵对斜坡从reagent-only (RO)样品,样品基体效应(MEs)进行评估。

样品我(%)为每个分析物是由百分比计算的山坡上的区别。MEs的大多数化合物低于20%(表3)。

克服基体效应,实现降低分析结果的变化,matrix-matched校准是受雇于这对每个分析物的量化研究。

标定是利用两个matrix-matched(毫米)和reagents-only (RO)标准。每个校准曲线由RO和肉样本矩阵显示良好的线性相关系数(R²)大于0.99。典型的校准曲线的例子中可以看到图3和图4所示。

校准曲线的四环素获得标准准备试剂。

图3。校准曲线的四环素获得标准准备试剂。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

校准曲线的四环素获得标准准备肉样本矩阵

图4。校准曲线的四环素获得标准准备肉样本矩阵。图片来源:PerkinElmer食品安全和质量

结转后评估通过注入试剂空白高浓度标准。没有观察到任何遗留的实验。

为了避免四环素的螯合金属离子的LC或列身体部位和峰值保持良好的形状和再现性运行,草酸水溶液加入流动相。3

方法显示良好的精度和相对标准偏差小于5%的五个复制。在流动相使用草酸的影响和重建溶剂再现性如表3所示。

每个分析物的再现性和峰值形状提高草酸的加入到移动阶段和重建溶剂。每个四环素的定量限分析发现低于肉类样品的允许公差水平。

这表明这个应用程序显示超过足够的灵敏度分析四环素肉在容忍水平。

量化的估计限制(定量限)TCs是基于信号/噪声(S / N)比10。所有的药物研究的定量限1.5±1.0µg / L。

研究结果表明,开发的方法适用于快速筛选和量化的四环素在肉类样品。

四环素的绝对复苏的范围在70 - 120%(表3)。利用氘四环素可以用来弥补损失的四环素在未来这个提取过程。

表3。保留时间的结果,基体效应(我),线性,恢复和再现性(%相对标准偏差)。来源:PerkinElmer食品安全和质量

复合名称 水平
(ng / g)
宽容
(x)		 RT(分钟) 我
(%)		 线性
(右2)		 复苏
(%)		 相对标准偏差与草酸
(%)(n = 5)		 相对标准偏差没有草酸
(%)(n = 5)
Oxytetracyline 200年 3.09 86年 0.9984 70.0 4.6 11.0
四环素 200年 3.26 80年 0.9997 116.0 4.9 16.0
金霉素 200年 3.65 96年 0.9991 87.3 1.9 9.5
Doxytetracycline 200年 3.73 94年 0.9980 71.6 1.5 8.0

结论

UHPLC / MS / MS方法的开发利用PerkinElmer高吞吐量QS-Works autosampler和LX 50 UHPLC耦合到一个QSight 420 MS / MS系统显示良好的灵敏度的识别和量化四环素在均质肉样品。

低水平的检测通过这个方法可以方便的支持低监管限制常规筛查和定量分析应用程序。

引用

  1. 最大残留限量的列表(MRLs)食品中兽药,加拿大卫生部,2017年8月。https://www.canada.ca/en/health-加拿大/服务/ drugs-health-products /兽药/最大- residue-limits-mrls / list-maximum-residue-limits-mrls-veterinary-drugs食物。2020年11月,通过。
  2. 标准方法(SMPRs性能需求®)筛选和识别监管食品中兽药残留的方法。SMPR2018_010。pdf (aoac.org)。2020年11月,通过。
  3. Sebastien Anizan Aurelien Desmarchelier, Mai明天山,玛丽-克劳德·萨&辛迪生物个体(2018)测定五四环素及其异构体的质/女士基于较低的液液萃取温度分区,食品添加剂和污染物:一部分,35:4,687 - 695 DOI: 10.1080 / 19440049.2018.1427894

确认

从材料最初由沙巴哈里里,Ab欧洲杯足球竞彩ir哈立德,Avinash Dalmia和冯从PerkinElmer秦,Inc .)

这些信息已经采购,审核并改编自PerkinElmer食品安全和质量提供的材料。欧洲杯足球竞彩

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  • 美国心理学协会

    PerkinElmer食品安全和质量。(2021年11月04)。高通量分析四环素在动物组织。AZoM。2021年11月14日,检索从//www.wireless-io.com/article.aspx?ArticleID=20922。

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    PerkinElmer食品安全和质量。“高通量分析四环素在动物组织”。AZoM。//www.wireless-io.com/article.aspx?ArticleID=20922。(2021年11月14日通过)。

  • 哈佛大学

    PerkinElmer食品安全和质量》2021。高通量分析四环素在动物组织。AZoM,认为2021年11月14日,//www.wireless-io.com/article.aspx?ArticleID=20922。

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