利用紫外显微镜和显微光谱学分析红细胞

在下面的实验中，我们用紫外光范围显微光谱学和紫外光显微镜对红细胞进行了研究。紫外可见显微光谱学是生物材料分析的一种重要方法。欧洲杯足球竞彩

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实验

的20/20 PV显微分光光度计从CRAIC技术是一个理想的解决方案，以简单，快速和无损的方式分析生物材料。欧洲杯足球竞彩对于这些实验，20/20 PV被配置为紫外范围的吸收显微镜和单个红细胞的光谱。

用吸收显微光谱法和紫外透射显微成像法研究了氟化钙基质上的红细胞样品。细胞中心形成约1µm直径的黑斑。对有无黑斑的细胞光谱进行了测量和比较。

采用CRAIC Technologies公司的20/20 PV显微分光光度计进行吸收微光谱分析，每次测量取20次平均扫描，光谱范围为250 ~ 850 nm。利用宽带紫外-可见-近红外光进行了成像和光谱实验。样品衬底上的空白作为参考。

微光谱分析所用孔径如下表所示:

孔径	大小
A6	1.5µm x 1.5µm
A5	3.2µm x 3.2µm
A4	6.5µm x 6.5µm

四个中心波长分别为415、281、267和232 nm的半宽带通滤波器用于成像分析。

测量

从CRAIC技术公司的20/20 PV显微分光光度计中获得的测量结果如下所示。

红血球和黑斑

图1显示了样本载玻片上一组红细胞的放大图像。所提出的意见如下:

• 方框中显示的细胞被认为是带有黑点的红细胞
• 采样区域的大小为1.5µm x 1.5µm (A6)
• 在500 nm以上，可以观察到光谱在一定波长范围内都有吸收峰

(一)

(b)

图1所示。(a)放大的红细胞(b)在细胞黑点处测量的光谱

没有黑斑的红细胞

在下面的图2中，方框周围的红细胞被认为是没有黑点的细胞。实验观察结果如下:

• 细胞光谱在275 nm和417 nm处有吸收峰
• 在480~540 nm波长处显示一个明显的光谱肩

(一)

(b)

图2。(a)放大的红细胞(b)细胞光谱

用不同孔径获得的显微光谱

接下来的一系列光谱显示了红血球中的化合物定位。下表列出了仅用于收集带有黑斑的红细胞光谱的孔径。

孔径	大小	图像在图中的定位
A6	1.5µm x 1.5µm	右上角
A5	3.2µm x 3.2µm	上中心
A4	6.5µm x 6.5µm	左下角

实验结果如下:

• A6只覆盖细胞的中心区域
• A4覆盖了整个单元格
• 三种光谱具有相同的吸收峰
• 与A4和A5相比，A6光谱在波长上增加了600 nm以上
• 这可能是由于细胞边缘造成的光谱结果的差异

图3。一系列显示红血球内化合物定位的光谱

血细胞边缘和中心的显微光谱

下面的两幅图显示的是在红细胞中心和边缘拍摄的光谱，它可以区分细胞内的化合物。这里使用了A6孔径。

a.有黑点的红细胞

光谱显示在中心区域有一个吸收峰在波长275和417 nm。在500 nm以上的波长处，光谱呈现不同的曲线。

图4。有黑斑的细胞的光谱

b.无黑斑的红细胞

中心区域的光谱在417 nm处有一个吸收峰，而边缘的光谱没有任何吸收。

图5。无黑斑细胞的光谱

使用CRAIC技术公司的20/20 PV显微分光光度计进行成像分析。

以下图片是在样本幻灯片相同的地方拍摄的。成像波长分别为白光、415、281、267和232 nm

图6。Whitelight成像

图7。415纳米成像

图8。281纳米成像

图9。267纳米成像

图10。232纳米成像

结果

吸收显微光谱分析结果

分别对有无黑点的红细胞进行吸收光谱分析，所得结果如下:

• 有和没有黑斑的红细胞在波长275和417 nm处有吸收峰
• 没有黑斑的细胞在275和417纳米处的峰值振幅比有黑斑的细胞要大得多
• 对于没有黑斑的细胞，中心区域有417 nm的吸收峰，而边缘区域没有吸收峰
• 有黑斑的细胞在500 nm以上的不同位置都有吸收峰，而没有黑斑的细胞则没有
• 中心区域有黑斑的细胞的光谱在500 nm以上的吸光度增加，而边缘的光谱吸光度降低

紫外线影像结果

采用紫外显微成像技术研究有无黑斑的红细胞。分析结果如下:

• 在280nm波长下，蛋白质吸收光;因此，紫外成像被认为是一个快速和精确的技术定位蛋白质分布。
• 在415 nm波长下，血红素组可观察到细胞造影剂增强，这反映了血红素在红细胞中的浓度和定位。
• 紫外微成像技术在核酸检测中也有应用，其最大光吸收波长约为260nm。

该信息的来源、审查和改编来自CRAIC技术公司提供的材料。欧洲杯足球竞彩

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