使用Multiser 4 Coulter计数器的蛋白质表征

2012年4月20日

贝克曼·库尔特（Beckman Coulter）的Multisizer 4提供了一种用户友好的技术化系统，可以解决大多数计数和粒度挑战。多层器4通过智能技术利用了库尔特原理，确保了统一性，样本分析的一致性和结果的可重复性。在表征低浓度的非常小的颗粒时，清洁程序很有价值。欧洲杯猜球平台本文详细讨论了分析程序。

Material Requirements

Nalgene 5 ml样品小瓶（Fisher P/N 6250-0005）。
Stage Adapter (Beckman Coulter P/N A93166).
Neutral Detergent Cleaner (Beckman Coulter P/N 8304096).
建议的孔：30μm，50μm，70μm或100μm。
内部光圈刷（Beckman Coulter P/N 54060001）。
外部光圈刷（Beckman Coulter P/N 5406011）。
Accuvette St（Beckman Coulter P/N A35473）。
200 mL增强性能烧杯（Beckman Coulter P/N A35596）。
异丙醇（可选）。
2％肥皂溶液（Beckman Coulter P/N A36403）的其他电解质罐（可选）。
注射器过滤器。
- PALL ACRODISC 25毫米PES过滤器。
- 0.45 μm pore (Beckman Coulter P/N 4614).
- 0.20μm孔（Beckman Coulter P/N 4612）。

程序

It is important to note that all buffers must be highly filtered to ensure precise counting. It is recommended that buffers are filtered through the 0.45 μm filter, followed by the 0.2 μm filter connected in serial. For convenience, continuous filtration with PES filters is recommended.

乐器启动

就本文分析的研究而言，多层器4的闲置已超过72小时。建议重复使用2％的中性洗涤剂溶液。可选地，可以使用异丙醇（IPA）。除去任何盐晶体，污垢或其他污染物，它们在闲置时可能在系统中形成。

Start-up Procedure

The start-up procedure of the Multisizer 4 comprises the following steps:

在Multisizer 4软件的菜单栏中选择“运行”，然后选择“排水系统”。按照屏幕上的说明进行操作。
On draining of the system, fill the electrolyte bottle with cleaning solution (either 2% soap or IPA).
更换多层器4中的电解质瓶。
在菜单栏中选择“运行”，然后选择“填充系统”。
填充系统后，重复步骤1-4。重复整个周期三次。
After the final drain, fill the system with highly-filtered Isoton II which should come from a continuous filtration system.

重要的是要注意，在此过程中，内部废物箱可能会饱满。在这种情况下，必须在提示时选择“空废水箱”。这将把内部废水箱的内容物泵送到外部废物罐中。

运行样本

基于正在运行的样本系统的类型以及表1中列出的指南，需要选择一个孔径。必须从菜单栏中选择“运行”，然后选择“更改孔径向导”。需要遵循屏幕上的说明。

表格1。Guidelines for buffer strength and lowest recommended size range.

Aperture	Lowest Recommended Conductivity (μS/cm)	近似NaCl浓度在DI水中	建议在此电导率下较低阈值
20*	15,000	154毫米	0.4 μm
30*	15,000	154毫米	0.6μm
50	5,000	40毫米	1.1 μm
70	3,750	30毫米	1.4μm
100	2,750	20 mM	2.3 μm

*不建议用于低导电缓冲区。

要遵循的步骤如下：

安装舞台适配器。样品阶段将在实验开始时出现，如图1所示。

Figure 1.Mini-Cuvette适配器允许用户使用仅4毫升材料操作多层器4。图片来源：贝克曼·库尔特
Fill a 5 mL Nalgene cup with the buffer of interest. It is important to note that for accurate results, this buffer must match the buffer in the electrolyte jar.
测试感兴趣的缓冲区中的噪声水平。从菜单栏中，选择“运行”/“故障排除”/“检查噪声级别”。将出现一个弹出框。选择“测量噪声水平”，如图2A和2B所示。
图2A。在运行/故障排除菜单下的“检查噪声级别”命令的屏幕截图。图片来源：贝克曼·库尔特
图2b。“检查噪声级别”命令的屏幕截图。选择“测量噪声水平”后，结果应匹配或超过表1中的建议。图片来源：贝克曼·库尔特
Check whether the standard operating mode (SOM) settings are configured as indicated. Choose “Edit SOM” to bring up the SOM menu. See Figures 3A and 3B.
图3A。“ SOM”菜单的屏幕截图。选择“编辑SOM”以打开SOM菜单。图片来源：贝克曼·库尔特
图3b。“编辑SOM”菜单的屏幕截图。使用SOM菜单中的标签进行导航。确保所有设置与文本中描述的设置匹配。图片来源：贝克曼·库尔特
1. Under the “Control Mode” tab - Verify whether the control mode is set to volumetric. The maximum recommended analytic volume is 100 μl per run. Select “Apply”.
2. 在“运行设置”选项卡下 - 确保检查“包含脉冲数据”。运行次数必须为3。选择“每次运行后的冲洗孔管”和“首次运行前的冲洗孔管”。选择“应用”。
3. Under the “Stirrer” tab - Check whether “Accuvette ST” is selected under “Sample Beaker”. Click “Apply”.
4. 在“电流和增益”选项卡下 - 验证尺寸阈值在表1中的最低尺寸下方或低于建议阈值。
5. Under the “Pulse to Size Settings” tab - Verify that the setting is at or above the lowest recommended size listed in Table 1. Select “SOP” in the menu bar, then “Edit the SOM.” Choose the “Pulse to Size Settings” tab. Check the value in the box next to the word “from”. Select “Apply”.
6. 在“浓度”选项卡下 - 如果适用，输入稀释信息。
7. Under the “Blockage” tab - Select “Blockage Detection”. Select “Defaults” then “OK”. Select “Blockage Monitor…”, “Defaults” and then select “OK”.
完成SOM协议后，仅通过选择“启动”来执行仅进行缓冲示例。仅缓冲液样品必须在100μl样品中读取少于100个总颗粒。欧洲杯猜球平台为了验证这一点，请确保已选择“数据”窗口中的“数字”。然后，检查统计框中的粒子计数。参考请参见图4。
图4。缓冲区的屏幕截图仅运行。The total number of particles should be less than 100 for a run of a 100 μl blank. “Number” should be less than 100 for analysis of 100 μl from a blank. Image credit: Beckman Coulter
仅缓冲区运行完成后，该仪器就可以运行样品了。卸下空白，加载样品，然后选择“开始”。
如果发生块，请按照步骤8“完成后”。
运行完成后，降低舞台。用2％的肥皂溶液填充烧杯或Accuvette，然后浸入孔可将烧杯握在手中，并将门打开。在Multisizer 4软件中选择“ Unblock”。这将通过光圈反复冲洗肥皂溶液并去除任何蛋白质。这是必要的，因为蛋白质倾向于粘附在所有表面上。完成解阻过程后，加载空白样品，关闭门，然后选择“预览”。浓度表应为0.0％。它可能需要几秒钟才能稳定。如图5a和5b所示，这是冲洗所有剩余样品所需的时间。
图5A。门打开后，将烧杯固定在孔周围的2％肥皂溶液。图片来源：贝克曼·库尔特
图5b。在使用肥皂解决方案握住烧杯的同时，选择软件中的“解阻”按钮。图片来源：贝克曼·库尔特
重复步骤6-8，直到所有样本完成。

仪器关闭过夜

Fill a 200 mL beaker with 2% soap solution. Flip the stage over so that the beaker can be accommodated. Place the beaker on the stage, but do not raise it.
In the Multisizer 4 software, select “SOP” in the menu bar. Select “Edit the SOM”. Under “Sample Beaker”, select “200 mL ST”. Ensure that the “Use Stirrer” box is selected and the stirrer speed is 20. Select “Apply”. The stirrer must move into position on the Multisizer 4.
舞台是用200毫升烧杯提出的。一旦淹没，搅拌器必须开始移动。该系统可以在此设置中放置一夜。第二天，需要遵循此过程的“运行样本”部分。