用激光扫描显微镜分析生物参数

生物医学科学是面向未来欧洲杯线上买球的关键研究领域之一，并利用强大的技术，在组织、细胞和分子水平上为生命系统的复杂机制提供新的见解。

多光子显微镜被认为是最小和非侵入性荧光显微镜领域的理想技术。卡尔蔡司的激光扫描显微镜LSM 710 NLO和LSM 780 NLO使研究人员能够以亚细胞分辨率创建非常深层组织的图像。

LSM 710 NLO和LSM 780 NLO

LSM 710 NLO和LSM 780 NLO与Carl Zeiss的AXIO审查员组合提供了用于电生理学研究和倒注成像的最佳多选态系统。

该系统与卡尔蔡司的倒置研究显微镜平台Axio Observer一起，为标准标本和培养细胞的成像提供了独特的多功能仪器(图1和2)。

三维形态

通过了解形态，可以很好地理解脑组织中的功能性互连。诸如脊柱和薄轴突过程的子蜂窝结构需要成像，由于广泛的电池工艺（图3）。

图1所示。单色样品在可见范围内激光激发后的XZ水平示意图(1)，使用多光子激光(2)和使用NDD(3)的替代检测。

LSM 710 NLO或LSM 780 NLO满足这些技术要求，广泛阻断激发光，并通过有效的光引导信号走向探测器。该系统具有GaAsPtype探测器，比传统PMT探测器高两倍的QE和更低的暗噪声，将荧光信号转换为3D图像，这将提供新的见解(图4)。

图2。沿Z轴的强度分布的比较显示使用多光电激光器的更深层的明显更好地激发。它还显示了使用非降临的探测器更有效的信号采集。

膀胱内成像

需要对Live标本进行最小的影响研究，以了解生物体内细胞的相互作用和功能联系。使用脉冲红外线（IR）激光的点激发在低水平的光毒率下最小侵入，从而产生适当的环境，用于分析现场标本。

由于低散射，红外激发光进入到组织的更深处，甚至可以在更深处看到亚细胞结构。同时使用各种染料和通道可以分析多达五种信号类型，从而可以分析各种结构之间的相互作用。

图3。投射神经元树突状分支的放大切片。

这种独特的系统还可以执行复杂的方法，如双光子释放与钙成像(图5)。这种局部定义的操作有助于分析生理过程和相互作用(图6)。

图4。在所有运动神经元中表达YFP的成年转基因小鼠胸锁乳突肌的神经肌肉连接。利用Zeiss W-Plan杂色板20×/1.0 NA浸取镜和双光子激发(880 nm)在活体动物中获得图像。Stephen Turney, MCB，哈佛大学，美国

三维时间分辨率

多光子系统的点激发大大降低了光毒性，因为光的损害作用只在焦点上。在胚胎学中，这项技术使研究人员能够广泛地分析发育过程，包括细胞组织和细胞分布。LSM 710 NLO和LSM 780 NLO能够在人工3D胶原基质或体内尽可能长时间地研究免疫活性细胞的行为(图7)。

图5。三维重建斑马鱼胚胎表达基因编码Ca2+指标，Cameleon。胚的早期发育阶段在25°c下观察13小时，在850 nm下刺激，时间戳受精后。

二次谐波(SHG)

SHG是一种非线性的光物理效应，在非线性显微镜中用于产生额外的对比度。在这个过程中，强入射激光的两个光子被驱动穿过可极化组织，转化为具有双重能量和频率级的单个光子。

SHG不需要染色，而且图像对比度是样品固有的结构(图8)。因此，二次谐波成像是探索活体组织和细胞的理想技术。额外的对比显示了在某些蛋白质中发现的结构和/或变化的关键数据。Axio Examiner上的LSM 710 NLO或LSM 780 NLO由于其特殊的光学，适合于这种应用。

图6。胚胎干细胞来源的小鼠运动神经元的二次谐波成像。运动神经元与ES细胞来源或原代胶质细胞长期共培养(5天)。该图像是利用低强度多光子激发(800 nm)同时获取的SHG (B)和斜光照对比度(a)信号的组合。标本由美国哈佛大学MCB Monica Carrasco提供

LSM 710 NLO和LSM 780 NLO的敏感性

LSM 710 NLO和LSM 780 NLO提供真实的和高对比度图像，因为它们具有优异的灵敏度，以及复杂的技术来抑制激光激发。改进的非降临探测器（NDD）与GAASP技术以及更好的光收集效率，确保厚组织样本和活动物（图9）确保了卓越的成像结果。

Figure 7。GAASP探测器用于AXIO检查器1.分束器2.收集镜头3.偏转镜4.聚焦镜头5. GAASP检测器

这些信息来源于卡尔蔡司显微技术有限公司提供的材料。欧洲杯足球竞彩

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