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高效液相色谱法或高压液相色谱法（HPLC）是用于在分析化学和生物化学化合物以鉴定，定量或纯化该混合物的各组分的混合物中分离的色谱方法。
反相HPLC或超高性能液相色谱法（UHPLC）是一种常用的分离模式。它提供了具有疏水性和有机官能团的化合物的动态保持。目标化合物并且两个固定相和流动相之间的所有疏水性和范德华型相互作用的组合使这些化合物通过反相的保留。
高效液相色谱是如何工作的?
在非常少的量中，将要分离和测试的样品混合物通过柱送入流动相流渗透。有不同类型的柱子可提供不同的粒子尺寸和表面的吸附剂。
混合物以不同的速度通过色谱柱，并与吸附剂相互作用，也称为固定相。混合物中各组分的速度取决于1)其化学性质，2)柱的性质和3)流动相的组成。某一特定分析物从色谱柱中出现的时间称为其保留时间。保留时间是在特定条件下测量的，并被认为是给定分析物的识别特征。
吸附颗粒可能是疏水欧洲杯猜球平台性的或极性。常用的流动相包括水和诸如乙腈和甲醇的有机溶剂混溶的任何组合。不含水的流动相也可以使用。
流动相的含水组分可能含有酸性，如甲酸，磷酸或三氟乙酸或盐，以使样品组分分离。流动相的组成在色谱分析期间保持为常数或如多变。恒定方法对于在其对固定相的亲和力中不太异常的分离的分离是有效的。在不同的方法中，流动相的组成与低至高洗脱强度不同。流动相的洗脱强度被分析物保留时间反映，其中高洗脱强度产生快速洗脱。
基于几个样品组分与固定相之间的相互作用强度选择流动相的组成。
HPLC分配过程与液-液萃取过程相似，但前者是连续过程，而后者是逐步过程。建议进行试验分区过程，以确定能提供充分分离的准确高效液相色谱方法。
HPLC系统制造商
在今天的市场上有广泛的HPLC选择。以下是各类高效液相色谱系统生产商的名单，并对他们的产品进行了简要介绍:
- 戴安，基于色谱的科学公司，制造了UltiMate®3000快速欧洲杯线上买球分离液相色谱系统，最终3000 RSLCnano系统和Corona®家庭普遍的带电气溶胶探测器。
- JASCO分析仪器提供一系列HPLC系统。该LC-2000 Plus系列高效液相色谱系统是唯一配置。高性能，低成本，这些HPLC系统可以适于从实质上简单等度QA到先进的多溶剂/多列的方法开发的任何要求。等度LC-2000+-ISO设置有泵，除气，自动进样器，和UV / Vis检测器。该泵被设计成从1μL流速10ml / min时在高达500巴的使用与图2，3，4，6和达10mm ID柱压力。的二元梯度LC-2000+-HPG类似于isocratic体系，但设置有双溶剂梯度泵配置。泵的流速是1mm厚的列兼容。所述四元梯度LC-2000+-LPG也类似于isocratic体系;然而，该模型具有用于最大灵活性溶剂的季梯度泵配置。
- 来自Gilson的制备型HPLC系统具有宽的流量范围，其可适用于半制剂和制备分离。其高泵送电力允许各种制备柱尺寸。该系统采用新的冲洗站系统，包括流动的喷射洗涤，并允许使用最多两种不同的冲洗溶剂。
- 从AAPPTec尖锐™HPLC系统设置有泵是微处理器控制的，因此能够高度精确的和高度精确的流率，它可以帮助获得出色的分析的重现性和最高的测量精度。
其他制造商在目前的市场是安捷伦，Beckman Coulter公司，Bio-Rad公司和巴克科学。
HPLC的好处
是HPLC系统的主要优势如下：
- 控制和自动化色谱仪器
- 提供数据管理，安全功能和报告和仪器验证。
- 强大而适应
- 通过管理所有分析领域 - 从样本到仪器，以及分离到报告结果，提高生产力。
- 合理的
HPLC的应用
高效液相色谱技术的主要目的是鉴定、量化和纯化特定的分析物或化合物。定量分析和定性分析都可以做。hplc可用于以下应用:
- 净水
- 检测制药行业杂质
- 痕量组分的预浓度
- 配体 - 交换色谱
- 蛋白的离子交换层析
- 碳水化合物和低聚糖的高ph阴离子交换色谱
高效液相色谱法
来源和进一步阅读
文章更新22nd四月，2019。