Wyatt DynaPro动态光散射(DLS)系统用于异二聚体蛋白复合物的表征

一种杂二聚体蛋白复合物(HPC)被认为是来自于火葡萄球菌的RNA结合功能。电镜观察表明，HPC的总分子量为65 kDa，在体外容易产生纤丝材料。欧洲杯足球竞彩

利用Wyatt DynaPro分析HPC的均匀性和稳定性^®动态光散射(DLS)系统在许多不同的缓冲条件下。观察发现，缓冲溶液的pH值对样品的均匀性和稳定性有影响。

仪表

怀亚特DynaPro DLS系统与动力学耦合^®V7用于在20°C下获取DLS数据^®V7.0.0.95用于执行分析。通过强度自相关函数可以直接测量样本的大小分布，如图1所示。多分散性指数是样品中各分子物种异质性的一个直接指标。

图1所示。HPC在pH 3.0和pH 7.5时的自相关函数。数据采集时间为5秒，每次测量10次，激光功率为100%(缓冲)和90% (HPC样品)。1)缓冲液pH 3.0和pH 7.5(重叠)，2)HPC pH 7.5，和3)HPC pH 3.0。在pH为3.0(可达~1.0 × 10)时，HPC含量较高，且衰减速率较长⁴pH为7.5时(最高可达~2.0 × 10)，µs的含量明显增加²µ年代)。

分析结果

如果多分散指数小于20%，则该分子物种是单分散的，否则就是异构的。分析结果表明，HPC在pH 7.5 (Tris-Cl缓冲液，3% NaCl)条件下的加权平均多分散性(%Pd)为19.5%，较HPC在pH 3.0(甘氨酸- hcl缓冲液，3% NaCl)条件下的加权平均多分散性(%Pd)为27.2%要小。

每个样本总共进行了10次测量。与pH为7.5的HPC相比，pH为3.0的HPC具有更大的物种组成，这是由自相关函数中更长的衰减速率决定的。如图2所示，自相关正则化拟合得到的直方图描述了上述条件下HPC的尺寸分布。

图2。HPC在pH 3.0和pH 7.5时的正则化直方图。HPC在pH 7.5(蓝色)和pH 3.0(红色)的柱状图。HPC的分布表明HPC可能在pH 3.0时发生聚集。pH为7.5时的HPC比pH为3.0时的HPC分散程度低，强度峰值较少。

从自相关函数中可以看出，pH为7.5的HPC在4.0 nm的流体动力半径附近产生了一个强峰，其峰值百分比强度为平均峰值百分比强度的90.5%(平均%I)，如图所示。pH为3.0时，HPC在水动力半径为13.0 nm和112.4 nm处出现两个峰，平均%I分别为32.8%和64.0%。

结果表明，pH为7.5时的高性能混凝土的稳定性和均匀性优于pH为3.0时的高性能混凝土，这是因为pH为7.5时的高性能混凝土的峰值有可能分裂为两个峰值，并向更高的水动力半径方向移动。

结论

利用DLS产率数据，利用多分散度和自相关函数测量HPC的生物物理性质的均匀性和稳定性。研究结果有助于确证HPC聚合在热力学上更有利的条件，从而提高样品制备质量，利用合适的缓冲条件进行生物物理研究，如结构分析。

这些信息已经从Wyatt Technology提供的材料中获得、审查和改编。欧洲杯足球竞彩

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