溶质的电泳迁移率很大程度上受溶剂环境的影响,特别是参数,如溶液pH,温度,溶质浓度,离子强度或配方辅料。
数据表明,在低离子强度时,溶质电荷占优势,通过长期相互作用产生排斥。在高离子强度时,反离子会越来越多地屏蔽这些离子间的相互作用,通常会导致溶质分子斥力的减少。
这一观察表明,离子屏蔽支持短期和中期的相互作用,但减少远程电荷-电荷相互作用。溶液离子强度的增加增加了溶质分子所在位置的反离子的数量,从而导致迁移率的降低。
本分析的目的是为了证明增加氯化钠(NaCl)浓度对牛血清白蛋白(BSA)的迁移率的影响。
高盐溶液的迁移率测量
在历史上,很难或不可能对电导率接近或高于生理盐水条件的水溶液样品进行迁移率测量。如果溶液导电,则在移动度测量中应用所需的电流会使电流穿过溶液。
这进而引发电化学氧化还原反应,导致电极表面电解,释放气泡,影响驱动电场,牺牲用于迁移率测量的光散射信号。
Möbiuζ (Mobius)流动池由怀亚特技术的Atlas配件加压,用于在高电导率下测量流动性,以抑制和减少现有气泡的总体体积。
Möbiuζ电池是一个封闭系统,便于自动化和高通量平行测量流体动力学半径和电泳流动性。预先编程的高效液相色谱序列提供了500 pL的样品注射,从而可以方便地自动测量多个样品。
分析和结果
样品在2 mg/mL的浓度下被制备到50 mM的磷酸盐缓冲盐水中,其中NaCl的总浓度在50 - 2000 mM之间。这反过来,50 mM磷酸盐的电导率范围在5.6 mS/cm之间;50 mM的NaCl和86.2 mS/cm的磷酸盐;和2000毫米NaCl。
每个样品进行6次测量的总时间为3分钟,另外还需要5-12分钟的时间来交付样品,停止流动,平衡,然后洗掉消耗的样品。每个样品注射三次,共18次测量。低样品温度(4°C)、低电压(3.5 V)和短测量时间的组合降低了电解和样品降解。
图1所示。电泳迁移率与增加盐浓度在4°C测量的2mg/mL BSA注射。
图1显示了在4°C下测量2mg/mL BSA注射时电泳迁移率随盐浓度增加的变化。在NaCl的最低浓度,即50 mM时,测量的迁移率非常高,为-0.51 mM cm/Vsec。随着NaCl浓度的增加,牛血清白蛋白的迁移率降低,最终在-0.33 mm cm/Vsec左右趋于平稳。
当NaCl达到2000 mM时,迁移率仍然接近这个值,相应的电导率为86 mS/cm。离子强度的增加导致与溶质分子相关的反离子增多,导致分子电荷的筛选,从而降低了电泳迁移率。
结论
通过使用Möbiuζ流池、Atlas和自动取样器,高盐度样品的自动分析成为可能,这可能是第一次。
Möbiuζ硬件的多功能性使它成为一个非常方便的工具,以测量流体力学半径和电泳流动性的配方和溶液在高离子度。这反过来又使在高盐缓冲液中制备的样品能够进行电荷表征。
这些信息已经从Wyatt Technology提供的材料中获得、审查和改编。欧洲杯足球竞彩
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