使用SEC-MALS技术对血红蛋白进行表征

血红蛋白是哺乳动物红细胞中的关键蛋白质，在将氧气从肺部输送到体内呼吸组织中起着至关重要的作用。氧气释放后，二氧化碳与血红蛋白结合，释放出体外。

仪器仪表

人类血红蛋白由四种多肽组成，其中四聚体根据条件与二聚体形式平衡。尺寸排除色谱法（SEC）、多角度光散射法（MALS）、Optilab DSP干涉折射计和Minidown检测器的组合用于血红蛋白表征，能够轻松获取绝对摩尔质量和摩尔质量分布的数据。

分析和结果

根据洗脱时间绘制血红蛋白摩尔质量图，如图1所示。峰上的摩尔质量不一致，这可能是由于色谱过程中发生了从四聚体到二聚体的平衡转移。

通过常规柱校准，可能难以区分从样品的小多分散性延伸的规则峰。然而，SEC-MALS测量更容易。

图1。用两柱结合MALS检测从SEC获得血红蛋白的摩尔质量与洗脱时间的关系。

牛血清白蛋白(BSA)是一种标准蛋白，通常用于柱校准。图2为血红蛋白与牛血清白蛋白摩尔质量与洗脱时间的重叠图。虽然两种蛋白质的摩尔质量几乎在同一范围内，但它们的形状和对应的洗脱时间完全不同。但是，由于BSA的结构比血红蛋白更致密，所以它比血红蛋白更容易洗脱。

图2。BSA和血红蛋白（具有相似摩尔质量的蛋白质）因血红蛋白结构更紧密而以不同体积洗脱。

结论

如果像许多实验室一样将BSA用作校准标准，则有可能严重低估血红蛋白摩尔质量。然而，通过将色谱法与miniDAWN或DAWN耦合，可以避免所有假设和错误结论。

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