使用SEC-MALS，差分折射动术和差分粘度仪器的HA性能的绝对特征GydF4y2Ba

透明质酸（HA）是一种天然存在的无支链多糖，是对化妆品，药​​理学，医疗和眼科应用中潜在使用的激烈研究的主题。HA的生理化学行为依赖于材料特性，包括分子构象，特性粘度（[η]），重均分子量（mGydF4y2Ba_W.GydF4y2Ba）和分子量分布或多分散指数（PDI）。GydF4y2Ba

Istituto di Chimica的Mendichi集团在Istituto di Chimica delle Macromolecole（米兰，意大利）已经使用MALS，单毛细管粘度凝集和浓度检测进行了许多涉及公顷的秒的分析。GydF4y2Ba

这些探测器的独特组合不仅决定了上述材料的所有特性，而且还利用Mark-Houwink-Sakurada (MHS)关系分析了样品的特性粘度和分子构象信息。本文介绍了在线绝对表征HA的性质，通过MALS，差示折射计，差示粘度计探测器系列。GydF4y2Ba

仪器GydF4y2Ba

该分析涉及来自不同来源的七种单独的HA样本，来自Sigma的卵泡，以及分析等级的所有其他所需的化学品。色谱系统包括HPLC系统，自动注射器（Agilent 1100,900-μL注入环）和溶剂脱气剂（ERC L761）。GydF4y2Ba

SEC柱系统包括带防护柱的聚合物实验室Aquagel - OH（8μm）分离柱。磷酸盐缓冲盐水（PBS，8mM二元磷酸钠，22mM磷酸钠，150mM在MilliQ级水中）是移动相，流速为0.5ml / min。GydF4y2Ba

系列中使用的色谱检测器是黎明EOS MALS装置，Viscostar差分粘度计和Optilab Rex差分衍射仪，来自Wyatt技术。MALS检测器有助于执行绝对摩尔质量计算，而无需列校准，参考标准或“美食因素”。GydF4y2Ba

差动粘度计采用传统的四臂毛细管桥梁设计，如图1所示。该桥由四个相等阻抗毛细管组成，其具有有效零阻抗延迟体积的左下臂。GydF4y2Ba

由于其固有的不敏感设计对压力波动，桥梁可以耐受中等泵脉冲。此外，该装置配备有珀耳帖热电装置，用于在更宽的温度范围内精确地热控制。现代电子，精确热控制和桥梁设计的独特组合产生了一个伟大的S / N的装置。GydF4y2Ba

图1。GydF4y2Ba差分粘度计设计的示意图。GydF4y2Ba

浓度测量用差示折射计进行。通过Peltier装置精确的热控制使热稳定在或低于室温，从而使设备具有稳定的基线和非常高的信噪比。GydF4y2Ba

从差分折射仪和η获得的浓度（c）值GydF4y2Ba_SP.GydF4y2Ba从差示粘度计获得的值可以通过使用MHS关系到整个洗脱峰的每个数据块直接计算样品特性粘度。光散射装置的加入使数据符合MHS方程。MHS的关系是，GydF4y2Ba

[η] = k mGydF4y2Ba^{一种GydF4y2Ba}

其中，m =分子量;'k'和'a'= mhs系数。GydF4y2Ba

这些MHS系数是溶剂相互作用和聚合物形状的测量。流体动力学体积V.GydF4y2Ba_HGydF4y2Ba还可以使用Einstein-Simha关系计算样品：GydF4y2Ba

V.GydF4y2Ba_HGydF4y2Ba= m [η] /（2.5nGydF4y2Ba_{一种GydF4y2Ba}）GydF4y2Ba

在哪里，nGydF4y2Ba_{一种GydF4y2Ba}是Avogadro的号码。流体动力半径rGydF4y2Ba_HGydF4y2Ba可以从v计算GydF4y2Ba_HGydF4y2Ba借助于以下等式：GydF4y2Ba

R.GydF4y2Ba_HGydF4y2Ba=（3V.GydF4y2Ba_HGydF4y2Ba/4π）GydF4y2Ba

采用怀亚特公司的ASTRA V软件包进行实验采集和数据分析。该软件可以收集并分析所有18个MALS角，以及AP、IP和差示折射测量信号。GydF4y2Ba

实验程序和结果GydF4y2Ba

在进行HA色谱分析之前，有必要确定特定于实验装置的确切系统常数。GydF4y2Ba

差示粘度计需要放置在差示折射计的上游，因为差示折射计的基线行为很容易受到反压的影响。因此，最后的检测器必须是折射计在色谱流动路径上的最佳信噪比。下表概述了七个HA样品的材料特性:GydF4y2Ba

表格1GydF4y2Ba。HA样品材料特性概述。GydF4y2Ba

HA样本GydF4y2Ba	哈来源GydF4y2Ba	mGydF4y2BaW.GydF4y2Ba(克/摩尔)GydF4y2Ba	PDI.GydF4y2Ba	R.GydF4y2BaGGydF4y2Ba（纳米）GydF4y2Ba	(η)(mL / g)GydF4y2Ba	R.GydF4y2BaHGydF4y2Ba（纳米）GydF4y2Ba
HA-1GydF4y2Ba	细菌发酵GydF4y2Ba	2.64E + 05GydF4y2Ba	1.19GydF4y2Ba	57.7GydF4y2Ba	632.GydF4y2Ba	27.7GydF4y2Ba
HA-2GydF4y2Ba	脐带GydF4y2Ba	2.84E + 05GydF4y2Ba	1.23GydF4y2Ba	66.1.GydF4y2Ba	652.GydF4y2Ba	28.3.GydF4y2Ba
HA-3GydF4y2Ba	鸡梳子GydF4y2Ba	6.62 e + 05GydF4y2Ba	1.10GydF4y2Ba	109.1GydF4y2Ba	1431GydF4y2Ba	51.1.GydF4y2Ba
哈-4GydF4y2Ba	细菌发酵GydF4y2Ba	1.10 e + 06GydF4y2Ba	1.45GydF4y2Ba	165.4GydF4y2Ba	1754年GydF4y2Ba	57.7GydF4y2Ba
哈-5GydF4y2Ba	脐带GydF4y2Ba	1.44E + 06GydF4y2Ba	1.06GydF4y2Ba	180.4GydF4y2Ba	2208GydF4y2Ba	77.7GydF4y2Ba
哈-6GydF4y2Ba	鸡梳子GydF4y2Ba	1.62E + 06.GydF4y2Ba	1.06GydF4y2Ba	182.4GydF4y2Ba	2671GydF4y2Ba	86.1.GydF4y2Ba
HA-7.GydF4y2Ba	“自然来源”GydF4y2Ba	1.76E + 06GydF4y2Ba	1.02GydF4y2Ba	207.9GydF4y2Ba	2655GydF4y2Ba	89.9GydF4y2Ba

所有溶液浓度为0.1mg / mL，在PBS中，注射体积为900毫升。HA的DN / DC值，0.167（mL / g）从文献中获得。选择低浓度和大的注射体积是为了防止分离塔内的HA样品的电位粘性粘附。结果符合文献值。对于每个样品，多次进行注射以验证结果的可重复性。GydF4y2Ba

一个典型的HA样品的η - sp色谱图和相应的MGydF4y2Ba_W.GydF4y2Ba，R.GydF4y2Ba_GGydF4y2Ba和r.GydF4y2Ba_HGydF4y2Ba整个峰值的值如图2所示。这些HA分析的痕迹的典型差分粘度计S / n为2200：1，比无脉冲，数据过滤的单一的单个数量级毛细管粘度率。GydF4y2Ba

图2。GydF4y2Ba典型的η.GydF4y2Ba_SP.GydF4y2BaHA样本的色谱图以及相关的mGydF4y2Ba_W.GydF4y2Ba，R.GydF4y2Ba_GGydF4y2Ba和r.GydF4y2Ba_HGydF4y2Ba峰值的值。GydF4y2Ba

已经为所有样本创建了MHS图以评估分子构象信息。样品HA-2的代表性MHS图如图3所示。还可以观察到图3中MHS轨迹的最小二乘回归。尽管本文未呈现，但是所有七个HA样本都显示了MHS曲率类似于如图3所示。GydF4y2Ba

图3。GydF4y2BaMark-Houwink-Sakurada图和线性适合样品HA-2。GydF4y2Ba

一种GydF4y2Ba_{一世GydF4y2Ba}图4所示的样品HA-2的值从低分子量时的1.0下降到高分子量时的近0.55。其他6个HA样本展示了aGydF4y2Ba_{一世GydF4y2Ba}与HA-2类似，具有典型的aGydF4y2Ba_{一世GydF4y2Ba}值在低分子量为1.1的值，高分子量为0.5。GydF4y2Ba

图4。GydF4y2BaMark-Houwink-Sakurada Plot，二阶拟合和AI与Log（MW）用于样品HA-2。GydF4y2Ba

这种行为与HA证明在较低分子量下的自由排出的非高斯链行为的理论良好。该聚电解质的固有刚度驱动分子以较低分子量呈现更延伸的构象，导致相应的高aGydF4y2Ba_{一世GydF4y2Ba}价值。当分子量增加时，aGydF4y2Ba_{一世GydF4y2Ba}值下降是由于HA转化为高斯链行为。这可能有助于描述在文献中发表的广泛的HA MHS常数。GydF4y2Ba

结论GydF4y2Ba

结果表明，MAL仪器，差动粘度计和差动折射仪的组合是探讨生物聚合物HA的材料特性的理想设置，包括绝对分子量，半径信息和分子量分布。测量值与历史文献值良好。GydF4y2Ba

使用这些检测器与软件一起使用，导致HA属性的快速，精确，绝对分析，具有前所未有的S / N，并且不需要任何探测器的校准曲线。GydF4y2Ba

此信息已采购，从Wyatt技术提供的材料进行审核和调整。欧洲杯足球竞彩GydF4y2Ba

有关此来源的更多信息，请访问GydF4y2Ba怀亚特技术GydF4y2Ba。GydF4y2Ba