在存在大分子的情况下测量蛋白质和小分子的大小

Malvern Allyticaltic粘剂200系统可以在极低的样品体积中自动测量粘度，并且也能够测量分子大小。使用光散射技术，例如动态光散射（DLS）或静态光散射（SLS），用于大小的蛋白质和其他分子，在低浓度和分子大小或存在污染物或沉淀物的情况下可能很难。

为了克服这些问题，Viscosizer 200系统使用UV区域成像和泰勒色散分析来计算流体动力半径，并以创新的方式确定分子扩散系数。该系统使用的样品很少，通常不含标签，并且与生物矩阵，复杂的缓冲液和溶剂以及包括污染物的彩色样品和溶液兼容。

Viscosizer 200使用复杂的微毛细管技术，可以检测到极低的浓度：> 0.2MaU等效于<0.05mg/ml溶菌酶。在本文中，粘膜200用于研究蛋白质和小分子大小分析，以及该技术如何补充蛋白质表征工作流中的光散射技术。

图1。粘膜200。

方法

首先，在10mm HEPES缓冲液中准备牛碳酸酐酶的最终浓度为10 mg/ml。然后，通过用Fresenius无菌水稀释1M HEPES储备溶液，并用0.5 M氢氧化钠或0.25 M盐酸来调节10mm HEPES缓冲液。

此后，用弗雷森菌无菌水和无菌 - 丝氨酸以1mg/ml的速度制备咖啡因，并过滤至0.02 µm。然后，在100％二甲基亚氧化二甲基（DMSO）中，将华法林准备为0.1毫米和1毫米，并过滤至0.02 µm。所有测量均在25下进行^o调节仪器的C和设置以抵消缓冲粘度。Viscosizer 200配备了214NM UV过滤器。

结果和讨论

如图2所示，使用粘膜200，检查了10 mg/ml碳酸酐酶（CBA）（CBA）。过滤后，通过测量Zetasizer Nano ZSP仪器上的相同溶液来验证这种尺寸。

这种高敏仪器利用非侵入性背散射（NIB）技术来精确计算溶液中分子的大小。如图3所示，该仪器的rh测量为2.6 nm，它与使用粘度器200所获得的2.7 nm的值密切一致。这表明粘固剂200可以正交以提供精确的尺寸数据，以便为样品提供精确的大小数据没有修改，未经过滤和未稀释。

图2。使用MALVERTALATIC粘膜剂200：10mg/ml CBA在10mm HEPES缓冲液中测量CBA的大小，未经过滤。流体动力半径计算为2.7 nm，在建模和实验数据之间具有非常好的数据拟合。

图3。r的测量_H使用Malvern Panalytical Zetasizer nano ZSP：10 mg/ml cba的CBA：10 mM HEPES缓冲液，PH7，过滤。峰1 = 2.6 nm r_H。总共收集了三个数据集。

粘合剂200用于小分子的尺寸

Viscosizer 200系统采用了高度敏感的紫外线成像来鉴定样品内的紫外线活性分子，从而使该技术适合于分析紫外线的小分子，由于其小尺寸，这些分子无法通过DLS技术进行分析。在这里，该仪器用于计算华法林（308.33 g/mol）和咖啡因（194.19 g/mol）的流体动力半径。

结论

粘膜200是一种先进的分析仪器，能够精确，可重复地测量蛋白质的大小，即使在无法过滤时存在污染物的情况下，也能够测量蛋白质的大小。该仪器可以通过动态光散射系统进行正交利用，以进行尺寸应用。

通过大规模加权吸光度进行的尺寸使该系统非常适合在低浓度下测量微型分子，否则对于光散射技术来说可能很难。

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这些系统范围从溶液，颗粒和纳米颗粒悬浮液和乳液中的蛋白质和聚合物到喷雾剂和气溶胶，工业散装粉末以及高浓度浆。Malvern Panalytication的工具在研究，开发和制造的各个阶段都使用，提供了关键信息，可帮助加速研究和产品开发，增强和维护产品质量并优化过程效率。

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