动态FLIM研究的成像相机:FLIMera

来自HORIBA Scientific的FLIMera相机是FLIM技术的最新概念。它不是一个共焦点扫描系统,而是一个宽视场成像相机,具有利用简单的相机技术研究视频速率下FLIM的动力学的固有能力。

特征

  • 直接获得衰变动力学
  • 每个像素架构的TCSPC提供高达24,576的并发衰减
  • 包含一个EzTime Image简单高效的软件界面
  • 理想的先进和复杂的分子分析,如检测生物标志物的疾病诊断和活细胞动力学
  • 复杂的多组分寿命
  • 样品分析与多达五个指数衰减

CMOS技术的进步导致了成像传感器的发展,构建在像素阵列上,每个像素具有单光子雪崩光电二极管(SPAD)及其相关的定时电子,也构建在时间到数字转换器(TDC)上。

这允许基于时间相关单光子计数技术(TCSPC)在每个像素单独实现的荧光寿命的快速(视频速率)测定。

SPAD和TDC夫妇。

图1。SPAD和TDC夫妇。图片信用:Horiba Scientific

像素图像传感器,测量192×128并以40nm CMOS技术实现,集成到宽场渗流器中设置成。传感器包括13%填充因子,每18.4×9.2-μm像素包含少于40ps分辨率的TDC。

这允许多达24,576个荧光寿命的并发测量,每个荧光寿命具有4,096级。在专业固件的帮助下,从Horiba Scientific的EZTime Image软件实现,从TCSPC成像测量中产生的平均寿命,荧光强度和相量绘图可以在超过30 fps的视频速率下实时显示(参见图2)。

同时给出了四个数据集。

图2。提出了四个同时​​数据集。图片信用:Horiba Scientific

操作模式

FLIMera相机已经开发使用高度直观的EzTime图像软件从堀场科学。该先进软件用于FLIMera控制以及数据的采集和分析。FLIMera相机提供四种操作模式。

  • 手动的- 用户的开始和停止采集提供了Flim数据和TCSPC强度图像,用于寿命分析。
  • 定时-用户自定义运行时间采集,提供FLIM数据和TCSPC强度图像,用于寿命分析。
  • 流到HDF5文件-TCSPC数据可以流,在用户定义的时间段内,到HDF5文件。这包括每个像素中的每个光子的完整记录,这样信息就不会丢失,可以用来重建帧进行完全衰减分析。
  • Phasor Plot.-creplenting直方图表示是潜在的旨在以实时相量绘图的形式演示和选择寿命数据(参见图3)。Phasor Plot应首先通过寿命标准进行校准。

phasor plot。

图3。phasor plot。图片信用:Horiba Scientific

使用FUN-1标记的酵母细胞和标准样品说明了视频速率的能力,如图4所示。

从FUN-1标记的酵母细胞寿命中提取的序列图像。

图4。从FUN-1标记的酵母细胞寿命中提取的序列图像。图片信用:Horiba Scientific

从Deltaflex杯杯系统衰减

图5A。来自DeltaFLEX试管系统的衰变。图片信用:Horiba Scientific

从24,578个SPAD像素中只有一个衰变演示了弗里米拉的高分辨率和TCSPC保真度。

图5B。从24,578个SPAD像素中只有一个衰变演示了弗里米拉的高分辨率和TCSPC保真度。图片信用:Horiba Scientific

这部电影和HORIBA

通过像素检测和定时技术的新颖性启用宽场成像方法。该成像方法显着降低了数据采集时间,从而促进了动态事件的分析。

FlIMera相机说明了堀场在荧光测量领域的悠久历史,并因获得令人垂涎的物理研究所商业创新奖而闻名。

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