CMS196仪器是与荷兰莱顿大学医学中心(LUMC)的Bram Koster教授的团队共同设计的，是四年研究和开发的成果。
相关阶段的发展是由于需要一种工具，使用荧光显微镜帮助定位感兴趣的结构样品的高分辨率低温电子显微镜成像。经过多年的发展，该系统已发展成为一种高效的仪器，能够在常规光学显微镜表征后对低温电子显微镜图像进行成像．
A.J. Koster，莱顿大学医学中心教授
CMS196V³Cryo-CLEM Stage:概述
cryo-CLEM仪表- cms196v³-允许一个完整的CLEM工作流程。它不仅可以通过液氮冷却使样品保持玻璃化，而且还具有安全转移和处理低温样品并通过光学显微镜成像的能力。同时，确保样品在任何时间都不受污染。
内置的机动化，编码阶段的新模型，连同最新的LINK软件帮助创建高分辨率的网格地图容易和快速。这使得在荧光显微镜和电子显微镜中识别同一标本所需的简单坐标映射技术成为可能。
虽然CMS196V³仪器的特别开发是为了解决从荧光显微镜到低温透射电子显微镜的电磁网格玻璃化问题，而没有污染和冷凝导致的玻璃化，但它还必须在光学方面进行改进，以方便使用高NA透镜。
多达三个栅格被放置在一个独特开发的盒式磁带中，反过来，它从一个插入式冰箱转移到一个紧凑的密封容器中。随后将该容器放入固定在直立荧光显微镜上的预冷干燥样品装载室中。然后，使用独特的操作工具，卡带很容易放置在观景桥上。
CMS196V³的特点/亮点
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自动充值液氮，可为箱体充值
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一个独立的低温样品观察系统，使样品在−196°C的恒定温度下陶瓷化，防止污染
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内置电机XY平台，位置读取超过1µm，并配有光学编码器，可实现高精度运动
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启动时间仅需10分钟，杜瓦和样品贴装之间无机械连接，稳定性好，长期稳定性好，在纳米范围内漂移小
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安装选项是可用于大多数研究级，立式显微镜从所有领先的制造商
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XY映射是完全自动化的
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支持自动栅格(FEI)， em栅格，Bessy栅格，膜载体(徕卡HPM100)， CryoCapCell cryoccapsule, planchettes和定制样品支架;没有必要管理裸网格
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一种自对准磁性样品盒系统可用于多达三个样本栅格
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是否可以与高压冷冻和跌落冷冻样品制备程序相关联
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样品盒持有人，使安全和无污染的装载，转移和储存的样品
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内置的聚光光学，使相位对比和传输光明亮场
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内置传感器帮助监测样品的温度
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全天单独操作，可选择3升自动灌装液氮杜瓦
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荧光观察高达0.9 NA
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自动加热“烘烤”循环去除水分
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液晶显示与按钮控制，全软件控制通过USB接口和独立操纵杆操作
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超过50个系统已经在全球范围内得到了验证，使Linkam Scientific成为Cryo-CLEM领域的市场领导者
相关显微镜-自动测绘的一个EM网格在高分辨率
高分辨率电磁网格的CMS196M自动制图。视频Credit: Linkam Scientific Instruments
为什么Cryo-CLEM ?
虽然电子显微镜(EM)提供了极好的分辨率的结构数据，但由于样品制备和染色程序的限制，它只能提供有限的理解化学和生物过程。相比之下，荧光显微镜是一种高度灵敏的技术，有助于检测活细胞内的遗传、化学和生物事件和过程。
现在，Cryo-CLEM将所有这些结合在一起:这是一种新颖的、新兴的方法，通过使用这两种方法成像同一标本的位置，并叠加互补数据，将EM和荧光两种方法的单个益处整合在一起。
在牛津、巴塞罗那和柏林的同步加速器对样本进行成像之前，我们正在使用低温相关阶段来筛选被困在薄冰层中的细胞。Linkam Scientific的团队帮助推动了我们的研究，快速调整和完善了这项技术，以提供一个优雅、灵活、用户友好的阶段．
露西·柯林森博士，弗朗西斯·克里克研究所电子显微镜的负责人
低温条件下陶瓷样品的成像
为了确保生物标本与电子显微镜中的真空条件兼容，并保存结构细节，标本被集成到玻璃状的冰中，这些冰应保持在−140℃以下。
应防止与大气湿度的任何接触，因为冰晶会迅速形成，从而污染标本。在低温条件下，荧光信号的结构细节得以保留，光漂白现象明显减少。
链接坐标变换工具
图片来源:Linkam科学仪器公司