红细胞锌原卟啉IX和原始卟啉IX的定量有助于诊断缺铁,铁限制促红细胞凋亡,铅暴露和卟啉状况。
一种基于双波长励磁的新方法消除了干扰背景荧光,从而实现了全血和组织测量。
慕尼黑(德国)-在血红素生物合成中,末端步骤是铁螯合酶将亚铁插入原卟啉IX (PPIX)中。在生理条件下,也会形成少量的锌原卟啉IX (ZnPP)。红系细胞中ZnPP和PPIX的浓度会因影响亚铁的可用性、增加PPIX的数量或降低铁螯合酶的活性的条件而发生变化。
遗憾的是,标准的hplc定量方法既耗时又复杂。替代方案也被证明在技术上过于苛刻或繁琐,不适合普遍采用。对于单独测量ZnPP,一种便携式前置荧光计,即血液荧光计,已在市场上出售。然而,它的使用受到其他血液成分的高背景荧光的限制,这使得样品洗涤不可避免。
来自Klinikum der Universität München(德国)的Georg Hennig领导的研究小组现在开发了一种新方法,可以同时定量未经清洗的血液样本中的ZnPP和PPIX。它基于双波长激发,有效地消除来自血液其他成分的背景荧光。所得结果与参比高效液相色谱法测定结果密切相关。
成功的关键是选择适当的激发波长。两者都应该经历几乎相同的吸收,并且它们的光谱分离应该很小,因此光子的渗透深度基本相同。负责自发荧光的荧光团的激发效率仅在两个激发波长之间仅少量不同,从而有效地消除了发射光谱的减法。
相比之下,被分析物荧光团的激发效率在这两个激发波长之间应该有很大的差异,因此发射光谱之间的差异很大,并没有消除被分析物荧光团信号。
这是425nm(ZnPP荧光激发最大值,593nm的发射最大值)和407nm的情况,作为具有相同氧化血红素吸收的相应波长,但基本上较低的ZnPP激发效率。
此外,由于407nm处的激发波长在397nm处接近Ppix激发最大值,发射光谱显示出在627nm处的明显ppix荧光发射峰。由于PPIX激发效率在425nm处低得多,因此在差异频谱中未消除PPIX荧光发射峰值,并且可以与ZnPP信号一起评估。
在用于在现场条件下使用的设备中可以简单且成本地实现新方法。此外,它可能会减少体内口腔粘膜如口腔粘膜的组织中的自发荧光,从而实现ZnPP和PPIX的非侵入性测量。